真核细胞常见表达载体

真核细胞常见表达载体真核细胞, 表达载体1、pCMVp—NEO-BAN 载体特点:该真核细胞表达载体分子量为 6600 碱基对，主要由 CMVp 启动子、兔 β—球蛋白基因内含子、聚腺嘌呤、氨青霉素抗性基因和抗 neo 基因以及 pBR322 骨架构成，在大多数真核细胞内都能高水平稳定地表达外源目的基因。更重要的是，由于该真核细胞表达载体中抗 neo 基因存在，转染细胞后，用 G418 筛选,可建立稳定的、高表达目的基因的细胞株。插入外源基因的克隆位点包括 Sal1、BamH1 和 EcoR1 位点。注意在此载体中有二个 EcoR1位点存在。2、pEGFP， 增强型绦色荧光蛋白表达载体(Enhanced Fluorecent Protein Vector)特点： pEGFP 表达载体中含有绿色荧光蛋白，在 PCMV 启动子驱动下,在真核细胞中高水平表达.载体骨架中的 SV40origin 使该载体在任何表达 SV40 T 抗原的真核细胞内进行复制。Neo 抗性盒由 SV40 早期启动子、Tn5 的 neomycin/kanamycin 抗性基因以及 HSV-TK 基因的聚腺嘌呤信号组成，能应用 G418 筛选稳定转染的真核细胞株.此外， 载体中的 pUC origin 能保证该载体在大肠杆菌中的复制，而位于此表达盒上游的细菌启动子能驱动 kanamycin抗性基因在大肠杆菌中的表达。用途: 该表达载体 EGFP 上游有 Nde1、Eco47111 和 Age1 克隆位点，将外源基因扦入这些位点，将合成外源基因和 EGFP 的融合基因. 借此可确定外源基因在细胞内的表达和/或组织中的定位。亦可用于检测克隆的启动子活性（取代 CMV 启动子,Acet1-Nhe1）.3、pEGFT—Actin, 增强型绿色荧光蛋白/人肌动蛋白表达载体特点：pEGFP-Actin 表达载体中含有绿色荧光蛋白和人胞浆 β-肌动蛋白基因，在 PCMV 启动子驱动下，在真核细胞中高水平表达。载体骨架中的 SV40origin 使该载体在任何表达SV40 T 抗 原 的 真 核 细 胞 内 进 行 复 制 。 Neo 抗 性 盒 由 SV40 早 期 启 动 子 、 Tn5的 neomycin/kanamycin 抗性基因以及 HSV—TK 基因的聚腺嘌呤信号组成，能应用 G418 筛选稳定转染的真核细胞株。此外， 载体中的 pUC origin 能保证该载体在大肠杆菌中的复制，而位于此表达盒上游的细菌启动子能驱动 kanamycin 抗性基因在大肠杆菌中的表达。用途: pEGFP—Actin 载体在真核细胞表达 EGFP-Actin 融合蛋白,该蛋白能整合到胞内正在生的肌动蛋白,因而在活细胞和固定细胞中观察到细胞内含肌动蛋白的亚细...