真核细胞常见表达载体真核细胞, 表达载体1、pCMVp—NEO-BAN 载体特点:该真核细胞表达载体分子量为 6600 碱基对,主要由 CMVp 启动子、兔 β—球蛋白基因内含子、聚腺嘌呤、氨青霉素抗性基因和抗 neo 基因以及 pBR322 骨架构成,在大多数真核细胞内都能高水平稳定地表达外源目的基因
更重要的是,由于该真核细胞表达载体中抗 neo 基因存在,转染细胞后,用 G418 筛选,可建立稳定的、高表达目的基因的细胞株
插入外源基因的克隆位点包括 Sal1、BamH1 和 EcoR1 位点
注意在此载体中有二个 EcoR1位点存在
2、pEGFP, 增强型绦色荧光蛋白表达载体(Enhanced Fluorecent Protein Vector)特点: pEGFP 表达载体中含有绿色荧光蛋白,在 PCMV 启动子驱动下,在真核细胞中高水平表达
载体骨架中的 SV40origin 使该载体在任何表达 SV40 T 抗原的真核细胞内进行复制
Neo 抗性盒由 SV40 早期启动子、Tn5 的 neomycin/kanamycin 抗性基因以及 HSV-TK 基因的聚腺嘌呤信号组成,能应用 G418 筛选稳定转染的真核细胞株
此外, 载体中的 pUC origin 能保证该载体在大肠杆菌中的复制,而位于此表达盒上游的细菌启动子能驱动 kanamycin抗性基因在大肠杆菌中的表达
用途: 该表达载体 EGFP 上游有 Nde1、Eco47111 和 Age1 克隆位点,将外源基因扦入这些位点,将合成外源基因和 EGFP 的融合基因
借此可确定外源基因在细胞内的表达和/或组织中的定位
亦可用于检测克隆的启动子活性(取代 CMV 启动子,Acet1-Nhe1)
3、pEGFT—Actin, 增强型绿色荧光蛋白/人肌动蛋白表达载体特点:pEGFP-Actin 表达载体中含有绿