绿色荧光蛋白(GFP)基因的克隆、表达和粗提取南方医科大学2024 预防医学（卫生检验检疫) 摘 要目的：讨论绿色荧光蛋白（green fluorescent protein,GFP）基因在大肠杆菌中的基因克隆与重组表达，以及对其进行粗提取. 方法：从 E.coli DH5ɑ 中用碱提取质粒的方法提取质粒 pEGFP—N3 和质粒 pET-28a.然后用质粒 DNA 的琼脂糖凝胶电泳对已经提取的产物进行电泳，确定从大肠杆菌中成功提取了质粒.再用限制性内切酶 BamHI 和 NotI 对成功提取的质粒进行酶切,并对酶切后的质粒进行琼脂糖凝胶电泳，用以确定已经提取了 GFP基因.将含有 GFP 基因的质粒转化到感受态细胞 E。coli BL—21 中，用 LB 培育基对转化后的 E.coli 进行扩大培育.用 IPTG 诱导 GFP 基因表达可以看到浅绿色菌落。最后对绿色荧光蛋白进行粗提取。 结论：本实验有助于学生掌握最基本的分子生物学实验技术，为进一步的实验奠定基础。关键词：绿色荧光蛋白 基因克隆 重组表达 转化 粗提取目录1 前言.....................................................................32 实验目的 ................................................................. 4 3 实验设备 ................................................................. 4 4 材料及试剂 ............................................................... 5 5 实验操作步骤 ............................................................. 5 5 。 1 操作流程 ........................................................................................................................................................ 5 5.2 质粒 DNA 的分离与纯化 ................................................................................................................................. 6 5.2 。 1 质粒的培育 ............................................................................................................................................. 6 5.2 。 2 质粒的 DNA 的碱提取法 ....................................................................................................................... 6 5 。 2.3 质粒 DNA 的鉴定与纯化 ......................................................
