Ultimate3000 型高效液相色谱仪自主操作培训教材福州大学测试中心2018 年 9 月第一部分Ultimate3000 型高效液相色谱原理和仪器配置色色素混合碳酸钙颗分离组分离组―、液相色谱原理简介1、色谱法起源色谱法最早是由俄国植物学家茨维特（Tswett）在 1906 年研究用碳酸钙分离植物色素时发现的，色谱法（Chromatography）因之得名。后来在此基础上发展出纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、液相色谱法。2、液相色谱法的分离原理溶于流动相（mobilephase）中的各组分经过固定相（stationaryphase）时,由于与固定相发生作用（吸附、分配、离子交换、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。又称为色层法、层析法。英文为 HighPerformanceLiquidChromatography，简称为 HPLC。右油醴3、HPLC 分离模式包括反相模式（RP-LC）；正相模式（NP-LC）；离子对色谱（IPC）；离子交换色谱（IEC）；体积排阻色谱（GPC/GFC）；亲和色谱（AC）等。其中，反相和正相模式又属于液液分配色谱。•流动相的极性小于固定液的极性（正相 normalphase），反之，流动相的极性大于固定液的极性（反相 reversephase）。正相与反相的出峰顺序相反；化学键合固定相：（将各种不同基团通过化学反应键合到硅胶（担体）表面的游离羟基上。C-18 柱（常用反相柱）。4、HPLC 与经典液相色谱方法以及气相色谱(GC)方法的比较4.1HPLC 与经典液相色谱方法比较高速：HPLC 采用高压输液设备，流速大增加，分析速度极快，只需数分钟;而经典方法靠重力加料，完成一次分析需时数小时。高效：填充物颗粒极细且规则，固定相涂渍均匀、传质阻力小，因而柱效很高。可以在数分钟内完成数百种物质的分离。高灵敏度：检测器灵敏度极高：UV——10-9g,荧光检测器——10-ng。4.2HPLC 与 GC 比较分析对象及范围：GC 分析只限于气体和低沸点的稳定化合物，占有机物总数的 20%；HPLC 可以分析高沸点、高分子量的稳定或不稳定化合物，这类物质占有机物总数的 80%。流动相的选择：GC 采用的流动相中为有限的几种“惰性”气体，只起运载作用，对组分作用小；HPLC 采用的流动相为液体或各种液体的混合，可供选择的机会多。它除了起运载作用外，还可与组分作用，即流动相对分离的贡献很大，可通过溶剂来控制和改进分离。操作温度：GC 需高温；HPLC 通常在室温下进行。5、HPLC 应用由于 HPLC 分离分析的高灵敏度、定量的准确性、适于非挥发性...
