专题九 现代生物科技专题核心考点整合考点整合一：基因工程1．基因工程的基本操作程序（1）目的基因的获取① 从基因文库中获取基因组文库：包含一种生物所有基因的基因文库。部分基因文库：包含一种生物的一部分基因，如 cDNA 文库。② 利用 PCR（多聚酶链式反应）技术扩增目的基因目的——获取大量的目的基因；原理——双链 DNA 的复制；条件——需要 DNA 模板、引物、四种脱氧核苷酸、耐高温的 DNA 聚合酶和酶促反应所需的离子，同时还要控制温度；过程——变性、复性和延伸。③ 人工合成如果基因比较小、核苷酸序列已知，可以通过 DNA 合成仪用化学方法直接合成。（2）基因表达载体的构建（基因工程的核心）一个基因表达载体的组成：目的基因、启动子、终止子和标记基因等。（3）将目的基因导入受体细胞① 导入植物细胞：农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法等；②导入动物细胞：显微注射技术，即采用显微注射仪将目的基因注入受精卵；③导入微生物细胞：转化法。早期用原核生物作为受体细胞，以大肠杆菌应用最广。一般是将细菌用氯化钙处理制成感受态细胞，再与重组表达载体 DNA 分子混合，在一定温度下完成转化过程。（4）目的基因的检测与鉴定类型 步骤 检测内容 方法 分 测 第一步 转基因生物染色体的 DNA 是否插入了目的基因 DNA 分子杂交技术（DNA和 DNA 之间） 第二步 目的基因是否转录出 mRNA 分子杂交技术（DNA 和mRNA 之间） 第三步 目的基因是否翻译成蛋白质 抗原—抗体杂交技术（抗原和抗体之间） 个体水 平鉴定 包括抗虫、抗病的接种实验，以确定是否有抗性以及抗性程度；基因工程产品与天然产品活性比较，以确定功能活性是否相同等 2.基因工程中的工具用心 爱心 专心1（1）运载体作为运载体必须具备三个条件：①能在宿主细胞中保存下来并大量复制；②有一个至多个限制酶切位点；③有一定的标记基因，便于进行筛选。如大肠杆菌割质粒携带的氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因，就可以作为筛选的标记基因。常用的运载体主要有质粒（双链环状 DNA 分子）、噬菌体或某些病毒。（2）相关酶酶的名称 酶的作用 限制性内切酶 能够识别双链 DNA 分子的某种特定的核苷酸序列，并使每条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，形成黏性末端或平末端 DNA 连接酶 将双链 DNA 片段“缝合”起来，恢复被限制酶断开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键 【例 1】 （2009·天津...
