多聚酶链式反应扩增 DNA 片段学习目标1．了解 PCR 技术的基本操作2．理解 PCR 的原理3．讨论 PCR 的应用学习重点PCR 的原理学习难点PCR 技术的基本操作课前预习使用说明与学法指导 根据学习目标，认真预习课本，用红笔标注重点与难点；15 分钟完成课前预习内容。知识准备 1. 搜集相关知识并阅读 2．复习回顾 DNA 分子的组成成分和结构3．PCR 原理：回忆 DNA 的复制过程 教材助读一、基础知识1.多聚酶链式反应的概念： 2.多聚酶链式反应的应用： 的诊断、 、 、 、 和 DNA 等各方面。 3.DNA 的两条链是 的，通常将 DNA 的羟基末端称为 ，而磷酸基团的末端称为 。DNA 聚合酶不能 开始合成 DNA，而只能 ，因此，DNA 复制需要引物。DNA 的合成方向总是 。4.在 DNA 的复制过程中，复制的前提是 。在体外可通过控制 来实现。在 的温度范围内，DNA 的双螺旋结构将解体，双链分开，这个过程称为 。PCR 利用了 DNA 的 原理，通过控制温度来控制双链的解聚与结合。由于 PCR 过程的温度高，导致 DNA 聚合酶失活，后来 的 DNA 聚合酶的发现和应用，大大增加了 PCR 的效率。5.PCR 反应需要在一定的缓冲溶液中提供： ， ， ， ，同时通过控制温度使 DNA 复制在体外反复进行。二、PCR 的反应过程（1）、PCR 一般要经历 循环，每次循环可以分为 、 和 三步。从第二轮循环开始，上一次循环的产物也作为模板参与反应，并且由 延伸而成 的 DNA 单 链 会 与 结 合 ， 进 行 DNA 的 延 伸 ， 这 样 ， DNA 聚 合 酶 只 能 ，使这段固定长度的序列成指数扩增。（2）、PCR 的反应过程变性：在 ℃时 DNA 解旋复性：在 ℃时引物与 DNA 单链结合延伸：在 ℃时合成 DNA 子链（两个引物间的序列）三、实验操作在实验室中，做 PCR 通常使用 ，它是一种薄壁塑料管。具体操作时，用微量移液器，按 PCR 反应体系的配方在 中依次加入各组分，再参照课本 P62 表的设置设计好 PCR 仪的循环程序即可。1变性复性延伸四、操作提示（1）、为避免外源 DNA 等因素的污染，PCR 实验中使用的 、 、 以及蒸馏水等在使用前必须进行 。（2）、PCR 所用的缓冲液和酶应分装成小份，并在 储存。使用前，将所需试剂从冰箱拿出，放在冰块上缓慢融化。在微量离心管中添加反应成分时，移液管上的枪头要 。预习自测题1．DNA 的 3’端是（ ），5’是（ ）A．羟...
