山东省菏泽一中 2014 年高中生物 2.4 动物细胞融合与单克隆抗体教案 新人教版选修 3动物的选择与免疫 1．动物的选择 纯种 BALB/C 小鼠，较温顺，离窝的活动范围小，体弱，食量及排污较小，一般环境洁净的实验室均能饲养成活。目前开展杂交瘤技术的实验室多选用纯种BALA/C 小鼠。 2．免疫方案 选择合适的免疫方案对于细胞融合杂交的成功，获得高质量的 McAb至关重要。一般在融合前两个月左右根据确立免疫方案开始初次免疫，免疫方案应根据抗原的特性不同而定。 （1）可溶性抗原免疫原性较弱，一般要加佐剂，半抗原应先制备免疫原，再加佐剂。常用佐剂：福氏完全佐剂、福氏不完全佐剂。 初次免疫 抗原 1～50μg 加福氏完全佐剂皮下多点注射或脾内注射（一般 0.8～1ml,0.2ml/点） ↓3 周后 第二次免疫 剂量同上，加福氏不完全佐剂皮下或 ip（腹腔内注射）（ip 剂量不宜超过 0.5ml） ↓3 周后 第三次免疫 剂量同一，不加佐剂，ip（5～7 天后采血测其效价） ↓2～3 周 加强免疫，剂量 50～500μg 为宜，ip 或 iv（静脉内注射） ↓3 天后 取脾融合 目前，用于可溶性抗原（特别是一些弱抗原）的免疫方案 也不断有所更新，如：①将可溶性抗原颗粒化 或固相化，一方面增强了抗原的免疫原性，另一方面可降低抗原的使用量。②改变抗原注入的途径，基础免疫可直接采用脾内注射。③使用细胞因子作为佐剂，提高机体的免疫应答水平，增强免疫细胞对抗原的反应性。 （2）颗粒抗原免疫性强，不加佐剂就可获得很好的免疫效果。以细胞性抗原为例，免疫时要求抗原量为 1～2×107 个细胞。 初次免疫 1×107/0.5ml ip ↓2～3 周后 第二次免疫 1×107/0.5ml ip ↓3 周后 加强免疫（融合前三天）1×107/0.5ml ip 或 iv ↓ 取脾融合细胞融合 1．细胞融合前准备 （1）骨髓瘤细胞系的选择：骨髓瘤细胞应和免疫动物属于同一品系，这样杂交融合率高，也便于接种杂交瘤在同一品系小鼠腹腔内产生大量 McAb。常用的骨髓瘤细胞系见表 2-4。 骨髓瘤细胞的培养可用一般的培养液，如 RPMI1640，DMEM 培养基。小牛血清的浓度一般在 10%～20%，细胞浓度以 104～5×105/ml 为宜，最大浓度不得超过 106/ml。当细胞处于对数生长的中期时，可按 1：3～1：10 的比例传代。每 3～5 天传代一次。细胞在传代过程中，部分细胞可能有返祖现象，应定期用 8-氮鸟嘌呤进行处理，使生存的细胞对 HAT 呈均一的敏感性...
