常用生化试验一．糖、醇发酵试验1、糖、醇发酵试验原理:各种细菌因含有发酵不同糖、醇得酶,所以分解糖、醇得能力个不相同。有得能分解某些糖、醇类,有得则不能分解。有得分解某些糖、醇类发酵产酸产气,有得仅产酸,而不产气。根据这些特点,可鉴别细菌。培育基:糖发酵试验应用得培育基种类很多,大致可分为液体,半固体,固体(高层、斜面)等几类。可根据试验得要求与细菌得特性来选择。2.乙酰甲基甲醇试验(VP 试验)原理:某些细菌如产气杆菌,分解葡萄糖产生丙酮酸,并将丙酮酸脱羧,变为乙酰甲基甲醇,乙酰甲基甲醇在碱性环境下,被空气中得氧氧化成二乙酰,二乙酰与培育基内蛋白胨中精氨酸所含得胍基起作用,生成红色得化合物。故在培育基中加入少量含胍基得化合物,如肌酸、肌酐可增加胍基含量。试验中加入得 α 萘酚为催化剂,可加速此反应,使反应颜色增加,提高反应得敏感性。大肠埃希菌不能将丙酮酸脱羧,故 VP 试验呈阴性。培育基:磷酸盐葡萄糖蛋白胨水培育基3.甲基红试验(MR 试验)原理:许多细菌如大肠埃希菌等,分解葡萄糖产生丙酮酸,丙酮酸再次被分解,产生甲酸、乙酸、乳酸等,这样使培育基得 PH 降至 4、5 以下。这时加入甲基红指示剂呈红色。若细菌分解葡萄糖产酸量少,或产生得酸进一步转化为其她物质(如醇、酮、醛、气体与水等),则培育基得酸度仍在 PH6、2 以上,故加入甲基红指示剂呈黄色,为阴性反应。培育基:磷酸盐葡萄糖蛋白胨水培育基MUG 葡萄糖醛酸苷酶试验原理:细菌得葡萄糖醛酸苷酶在碱性条件下 ,作用于 4 甲基伞形酮 βD 葡萄糖醛酸甘(4MethylumbelliferylβDglucuronide 简称 MUG)得 β 葡萄糖醛酸甘键,使其水解,释放得 4 甲基伞形酮在 366nm 紫外灯下产生蓝白色荧光。培育基:MUG 培育基4.β 半乳糖苷酶试验原理:肠杆菌科细菌发酵乳糖,依靠半乳糖苷渗透酶与 β 半乳糖苷酶两种不同得酶作用,能水解邻硝酸酚 βD 半乳糖苷(OnitrophenylβDgalactopyranoside,ONPG),而释放出黄色得邻硝酸酚。发酵乳糖得细菌具有上述两种酶,可迅速分解乳糖。迟缓发酵乳糖得细菌只有 β 半乳糖苷酶,而缺少半乳糖苷渗透酶或就是其活性很弱,不能将乳糖很快运送到菌细胞内,通常需要延长培育时间数天,乳糖才被分解。本实验主要鉴别肠道细菌,乳糖发酵及乳糖迟缓发酵菌为阳性反应,非乳糖发酵酶为阴性。本试验可作为迟缓发酵乳糖得细菌得快速鉴定方法。5.葡萄糖氧化发酵(O/F)试验原理:细菌对糖得代谢分为氧化型与发酵型两种。在有氧环境下氧...
