专题 15 基因工程和细胞工程1.近五年的全国卷高考试题中对于基因工程的考查频度较高，侧重考查操作工具的种类、功能以及操作基本程序的应用等。动物细胞工程技术中的核移植技术及单克隆抗体的制备也有所考查。2．题目常借助简洁的文字材料或模式图等考查有关基因工程、动物细胞工程的原理、技术手段等，尤为注重对教材中一些关键词的填充及对结论性语句的准确表述等。3．备考时，应从以下四个方面入手复习：(1)列表比较法掌握限制酶、DNA 连接酶和载体的作用。(2)实例分析法理解基因工程的原理和过程。(3)列表比较法理解两个不同，即植物组织培养和动物细胞培养的不同、植物体细胞杂交与动物细胞融合的不同。(4)图解法分析并掌握单克隆抗体制备过程。【知识网络】一、基因工程 1．基因工程的基本工具 限制酶 DNA 连接酶 (运)载体 作用 切割目的基因和载体 拼接 DNA 片段形成 重组 DNA 携带目的基因进入受体细胞 作 用 部位 两核苷酸的脱氧核糖与磷酸间形成的磷酸二酯键 ------------------作 用 特点 ( 条件) ① 识别特定的核苷酸序列 ② 在特定位点上切割 ①E·coli DNA 连接酶只能连接黏性末端 ②T4 DNA 连接酶能连接黏性末端和平(口)末端 ① 能在宿主细胞内稳定存在并大量复制 ② 有一个或多个限制酶切割位点 ③ 具有特殊的标记基因 2．基因工程的操作步骤 (1) 目的基因的获取： ① 从基因文库中获取。 ② 利用 PCR 技术扩增。 ③ 用化学方法直接人工合成。 (2) 基因表达载体的构建： ① 基因表达载体的组成：目的基因＋启动子＋终止子＋标记基因。 ② 基因表达载体的构建方法： (3)将目的基因导入受体细胞： 植物细胞 动物细胞 微生物细胞 常用方法 农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法 显微注射技术 感受态细胞 法(用Ca2＋处理) 受体 细胞 受精卵、体细胞 受精卵 原核细胞 (4) 目的基因的检测与鉴定： ① 目的基因插入检测：DNA 分子杂交。 ② 目的基因转录检测：(核酸)分子杂交。 ③ 目的基因翻译检测：抗原—抗体杂交。 ④ 个体生物学水平检测：根据目的基因表达出的性状判断。 二、细胞工程1．动物细胞培养与植物组织培养的比较 项目 动物细胞培养 植物组织培养 培养前处理 无菌、用胰蛋白酶处理，使组织细胞相互分散开 无菌、离体 培养基成分 葡萄糖、氨基酸、无机盐、促生长因子、微量元素、动物血清等 矿质元素、蔗糖、维生素、植物激...
