流式细胞仪操作规程目录1:淋巴细胞亚群测定及绝对计数2:活化淋巴细胞亚群、记忆 T 及纯真 T 得检测3:HLA—B27 测定4:C D 55/C D 59 测定5:干细胞检测与绝对计数6:白血病免疫分型测定7:淋巴细胞 T 细胞亚群细胞内因子 IFN-γ/IL—4 测定8:细胞周期分析9:活化血小板检测10:血小板抗体测定11:红细胞抗体测定1 2:粒细胞抗体测定淋巴细胞亚群测定(流式细胞仪) 医院检验科操作规程文件号:200 年 月 日起实施第 1 版(共 3 页) 本规程每 2 年复审一次 复审日期: 年 月 日 复审人: 规程编写者: 审 批 者: 批准日期: 年 月 日 文件分发部门与/或个人 院档案室保管者: 检验科 主任: 检验科 实验室: 淋巴细胞亚群测定方法 流式细胞仪(Be c kmanCo u lte r,贝克曼库尔特)原理: 双/三色/四色直接免疫荧光法。荧光素标记得各种单克隆抗体加入到全血中,与白细胞膜上相应得抗原结合,经过溶血、洗涤(与固定)等步骤后,在流式细胞仪上进行分析,从而得到淋巴细胞亚群得百分数,加入 Flow—C ount 即可得出绝对计数.淋巴细胞表面抗原分布如下:T 淋巴细胞:CD 3+;B 淋巴细胞:CD3—,CD l9+;辅助性 T 淋巴细胞:C D3+C D4+;抑制性 T 淋巴细胞:CD3+C D8+;NK 细胞:CD3—CDl 6+5 6+等.根据淋巴细胞膜上 CD 分子表达得不同,流式细胞仪可以分辨出淋巴细胞及其各种不同得亚群,利用计算机软件计算出淋巴细胞亚群得百分数,加入 F l ow-Count 组会自动得出绝对计数。标本采集与处理 受检者得准备 检查对象生活饮食处于日常状态。 采集部位 静脉采血抗凝剂 E DT A 或肝素抗凝血 要求 1.样本量 1 m l. 2.样本应在采集后 6 小时内处理,冷冻或溶血得标本不能用。 3.样本白细胞计数应在4、0-10、0×1 0 9/L 之间。若〉10、0×109/L, 样本需要稀释,用PBS稀释;若<4、0×109/L,应分离单个核细胞。 试剂 品牌 剂型 规格 贮存 贝克曼库尔特成分 1:单克隆抗体 液体 2-8℃ (C D 45/4/8/3 No、6607 0 13 CD 4 5/56/1 9/3 No、660 7 0 73 CD 4/8/3 No、IM1650 同型对比 IgG1/IgG1/I gG1 No、IM1672 CD 3/1 9 N o、I M 1293 CD3/16+56 No、I M20 7 6 CD19-PC5 No、I M 2 643F lo w-Coun t荧光微球 N o、) 2:全血溶血试剂(Q-Prep) 液体(No...