技术报告一、立题依据及指导思想近 20 年来，随着我国畜牧业的繁荣和进展，国内畜禽的饲养环境与饲主的饲养观念以及生产成本高涨的压力下，密饲已成为不正确的趋势，加上卫生管理上的缺失，疾病的发生日趋复杂化，兽药(包括药物添加剂)的使用日益广泛，兽药的使用无疑会导致兽药及其代谢产物在动物体内的滞留或蓄积，并以残留的方式进入人体及生态系统。兽药残留问题不仅涉及到宽阔人民群众的生命安全与健康，还涉及到生产经营企业的经济利益和国家经济的进展。去年以来，各地多宝鱼事件、"红心"鸭蛋事件、"瘦肉精"中毒等食品安全事件频发，食品安全问题导致我国农产品、食品国际贸易屡次受阻，损害了出口信誉和国家形象。目前，中国的食品已经出口到全球２００多个国家和地区。２００６年中国出口食品２４１７.３万吨，货值２６６.５９亿美元。近期，宠物食品和食品安全事件的出现，使中国的产品质量和食品安全状况备受关注。随着我国经济的进展和社会的进步，食品生产经营和消费格局的变化，以及经济和贸易的全球化，食品安全监管工作面临一些新形势。公众对食品安全的关注度将继续增加，食品安全事件极易引起全社会的广泛关注。 要提高畜禽产品的质量，确保畜禽产品的安全，除了严格控制疫情、加强饲养管理和对兽药及添加剂残留的监测与控制外，开发出新型的可替代抗生素的抗菌肽饲料原料和添加剂至关重要。由于抗菌肽具有广谱杀菌作用、相对分子量较小、热稳定、水溶性好等优点，更为重要的是抗菌肽对真核细胞几乎没有作用，仅作用于原核细胞和发生病变的真核细胞，在当前不少病原菌对原有抗生素逐步产生耐药性时。应用无毒无公害的新型抗菌剂代替抗生素作饲料添加剂，已成为当前国内外饲料学科的一项重要内容。抗生素作饲料添加剂严重影响畜产品在国际市场的竞争力，应用生物技术讨论与开发新型抗菌剂是我国科学界一项紧迫的任务。本项目用牛粪和食用菌渣等农业废料通过发酵处理成蚯蚓喜食的饵料，规模化生产鲜蚯蚓。将收集到的鲜蚯蚓用超声诱导技术诱导蚯蚓抗菌肽的高表达。然后将超声处理抗菌肽高表达的蚯蚓匀浆后离心, 用超滤的方法截留分子质量小于 1 ku 的粗组分。经过超滤截流的粗组分用阳离子交换剂 SP-Sepharose Fast Flow 和蛋白质液相色谱(FPLC)分析 Pharmarcia FPLC 系统收集抗菌肽，并得到纯化的抗菌肽。纯化的抗菌肽用电喷雾离子源质谱(ESI-MS)测其分子质量及纯度。接着用串联质谱(MS/MS 法， Bruker ESQUIRE-L...
