生物化学与分子生物学技术 重点试题归纳

1、 说出三种蛋白质得测定方法，若您选择，您会选择哪一种？为什么？答：双缩脲法、lowry 改良法、考马斯亮蓝（Bradford）法、BCA（二喹啉甲酸）法、紫外线分光光度法。我会选择 BCA 法。双缩脲法灵敏度差，特异性不高。Lowry 改良法对样品得溶解度要求高、易受物质干扰且容易产生测量误差。紫外线分光光度法得精确度差。而BCA 法则能较好地弥补以上方法得缺点。它具有操作便捷快捷、精确度高、抗干扰能力强、能使用于微板孔等特点。2、 western blot 印记中封闭液得作用？答：封闭液可以结合非相关蛋白得位点以降低非特异性结合得背景。3、 γ 球蛋白得提取过程。答：（1）盐析—中性盐沉淀： 通过加入半包与硫酸铵可以使球蛋白沉淀，清蛋白留在溶液中。得到 γ 球蛋白粗制品。 （2）脱盐—凝胶柱层析： 经过凝胶柱层析，使得大分子得蛋白质与小分子得盐分离。 （3）纯化—DEAE 纤维素阴离子交换层析 用阴离子交换层析可以把在 PH=6、3 得缓冲液中得带负电得 α、β 球蛋白与带正电得 γ球蛋白分离。使 γ 球蛋白被洗脱出来被纯化。 （4）经过浓缩得到浓度高得 γ 球蛋白4、离子交换剂得原理答：离子交换剂就是一种在高分子得不溶性载体上结合有若干活性基团，这些活性基团含可解离得离子并与溶液中得其她离子进行交换。5、 假如 western blot 中出现两条带，就是否说明有杂质？为什么？答：并不说明有杂质。因为在实验中我们得检测对象就是人血清 IgG，IgG 就是由两条轻链与两条重链通过二硫键结合起来，变形后轻、重链分开，形成两条带（21KD、57KD）6、 分别简述 DNA 提取中蛋白酶 K、SDS、无水乙醇、RNase 得作用答：蛋白酶 K：将蛋白质降解成小肽或氨基酸，使 DNA 分子完整地分离出来。SDS：破坏细胞得细胞膜、核膜并使组织蛋白与 DNA 分子分离无水乙醇：可以使 DNA 沉淀RNase：可以去除溶液中得 RNA（EDTA：抑制细胞中得 DNase 活性）7、 试述转化质粒蓝白筛选得原理。答：载体质粒 DNA 带有 b-半乳糖苷酶 N 端 146 个氨基酸残基（α 片段）得编码信息，经过改造得宿主菌含有 b-半乳糖苷酶 C 端（ω 片段）得序列。只有当两个片段都存在得时候才能形成有活性得 b-半乳糖苷酶（这种现象称为 α-互补）。b-半乳糖苷酶在 IPTG 得存在下可以使底物 X-gal 转变为蓝色产物，使菌落变为蓝色。当外源 DNA 片段插入载体得多克隆位点后。便不能表达 α 片段，转化细菌后不...