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生物化学与分子生物学技术 重点试题归纳

生物化学与分子生物学技术 重点试题归纳_第1页
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生物化学与分子生物学技术 重点试题归纳_第3页
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1、 说出三种蛋白质得测定方法,若您选择,您会选择哪一种?为什么?答:双缩脲法、lowry 改良法、考马斯亮蓝(Bradford)法、BCA(二喹啉甲酸)法、紫外线分光光度法。我会选择 BCA 法。双缩脲法灵敏度差,特异性不高。Lowry 改良法对样品得溶解度要求高、易受物质干扰且容易产生测量误差。紫外线分光光度法得精确度差。而BCA 法则能较好地弥补以上方法得缺点。它具有操作便捷快捷、精确度高、抗干扰能力强、能使用于微板孔等特点。2、 western blot 印记中封闭液得作用?答:封闭液可以结合非相关蛋白得位点以降低非特异性结合得背景。3、 γ 球蛋白得提取过程。答:(1)盐析—中性盐沉淀: 通过加入半包与硫酸铵可以使球蛋白沉淀,清蛋白留在溶液中。得到 γ 球蛋白粗制品。 (2)脱盐—凝胶柱层析: 经过凝胶柱层析,使得大分子得蛋白质与小分子得盐分离。 (3)纯化—DEAE 纤维素阴离子交换层析 用阴离子交换层析可以把在 PH=6、3 得缓冲液中得带负电得 α、β 球蛋白与带正电得 γ球蛋白分离。使 γ 球蛋白被洗脱出来被纯化。 (4)经过浓缩得到浓度高得 γ 球蛋白4、离子交换剂得原理答:离子交换剂就是一种在高分子得不溶性载体上结合有若干活性基团,这些活性基团含可解离得离子并与溶液中得其她离子进行交换。5、 假如 western blot 中出现两条带,就是否说明有杂质?为什么?答:并不说明有杂质。因为在实验中我们得检测对象就是人血清 IgG,IgG 就是由两条轻链与两条重链通过二硫键结合起来,变形后轻、重链分开,形成两条带(21KD、57KD)6、 分别简述 DNA 提取中蛋白酶 K、SDS、无水乙醇、RNase 得作用答:蛋白酶 K:将蛋白质降解成小肽或氨基酸,使 DNA 分子完整地分离出来。SDS:破坏细胞得细胞膜、核膜并使组织蛋白与 DNA 分子分离无水乙醇:可以使 DNA 沉淀RNase:可以去除溶液中得 RNA(EDTA:抑制细胞中得 DNase 活性)7、 试述转化质粒蓝白筛选得原理。答:载体质粒 DNA 带有 b-半乳糖苷酶 N 端 146 个氨基酸残基(α 片段)得编码信息,经过改造得宿主菌含有 b-半乳糖苷酶 C 端(ω 片段)得序列。只有当两个片段都存在得时候才能形成有活性得 b-半乳糖苷酶(这种现象称为 α-互补)。b-半乳糖苷酶在 IPTG 得存在下可以使底物 X-gal 转变为蓝色产物,使菌落变为蓝色。当外源 DNA 片段插入载体得多克隆位点后。便不能表达 α 片段,转化细菌后不...

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