操 作 标 准目得：为了使 BP Ｇ 3 ０ 0 层析柱装柱过程可重复，并能够得到较好得柱效,故建立此操作法律规范.范围:配合 Ä Ｋ TA pr ｏ ce ｓ s 系统进行有效得蛋白质纯化操作。责任人：层析工序操作人员标准操作程序:1 基本术语概念填料因子（Pa ｃ k ｉ n ｇ Fact ｏｒ， PF）:指在在装柱过程中,用低流速（如6 ０ c ｍ/ｈ)对填料进行沉降压缩得到得调料高度与最后装柱完成时填料高度（柱高）得比值，ＧＥ HC 生产得各种常见填料得 PF 参见《G ＥＨＣ Ａ x ｉＣ hr ｏ m 30 ０-１００ 0 columns U ｓ er Manua ｌ ２８－956 ２—89 Editi ｏｎ AA》；线性流速（line ａ r flow r ａ te):单位时间内液体流经得直线距离,常用ｃｍ/h 表示;体积流速（vol ｕ m ｅ fl ｏｗ rate)：单位时间内液体流经得空间容积,常用ｍl/m ｉ n 表示；换算：2 准备工作２、1 检查层析柱得完整性，所带配件,就是否水平（用水平仪矫正)，就是否清洁(如有污染应进行清洗）。2、2 确定所用填料及其特性、浓度等以ＤＥ AE Sepharose Ｆ as ｔ Flow 填料为例，其填料因子（PF）为 1、１ 5,新填料（sl ｕ rry）浓度为 75%(保存于 20％乙醇中），耐压３ ba ｒ.2、3 确定放大后得工艺参数以ＸＸ生化制药股份有限公司得放大工艺为例，中试工艺参数:柱高 h=1 ０ cm;体积流速 v １＝3 ｍ l／min；柱内径ｄ=1、6cm、即，线性流速 v2＝v １/ｓ柱=３/（３、14×０、82） cm/m ｉ n=1、5 cm/mi ｎ；样品与填料接触时间 t=ｈ/v ２=10／1、５ mi ｎ＝6、６ 7 ｍ i ｎ;在工艺得线性放大中 h、v2 与 t 均不变，则可保证样品出峰得位置（洗脱时间）与形状不变。使用 BPG3 ０ 0 层析柱进行放大得工艺参数:装柱体积 V 柱= Ｓ柱h=３、14×１、52×1 Ｌ=7 Ｌ;装柱需要 slu ｒ ry 体积Ｖ slurry=V 柱×P Ｆ/Csl ｕｒｒｙ以 DEAE S ｅ p ｈ arose Ｆ ast Flow 为填料,则,Vslurry=7×1、１５/0、７ 5L＝10、73 Ｌ；装入柱中得 s ｌｕ rry 高度 Ls ｌ urry=Vslurry/S 柱=1 ０、73／（３、14×1、52)ｄm=1、52dm=15、2c ｍ、3 管路安装３、1 层析柱管道与配件安装3、1、1 卸下柱子顶部与底部得盲堵垫圈，旋松密封调节器，用纯水或 2 ０％乙醇充分浸润柱内壁与柱头 O 型圈;3、1、2 用扳手对称卸下支持杆连接到法兰得螺丝,并通过...
