《分子医学实验学》供口腔、护理、药学各专业实验指导规则1.实验前必须预习实验指导和相关理论知识,明确实验目的、原理、预期的实验结果、操作关键步骤及注意事项,计划安排实验工作时间。2.穿白大衣准时进入实验室,保持实验室整洁安静,不得谈笑和大声说话,不准做与实验无关的事情。3.实验时应持“三严”作风——态度严谨、思维严密、操作严格。实验中认真、仔细观察实验过程中的实验现象和结果,及时如实的做好原始记录。实验失败须重做。根据实验结果进行科学分析,写好实验报告,交指导教师批阅。4.注意安全,不得擅自离开。使用易燃、易爆、有毒试剂和材料进行实验时,应严格遵守操作规程,防止火灾、中毒、污染、触电等事故发生,一旦发生,果断处理并立即报告教师5.爱护公物,防止损坏,若有损坏及时报告原因并登记。公用仪器就原处使用,了解使用方法及遵守操作规程,使用后必须在仪器登记本上登记并签名。公用试剂就近量取、用毕随时放回原处。要节约水、电、煤气及试剂药品6.实验结束,洗净器材,清整实验室,打扫卫生,检查门、窗、水、电和煤气的安全。目录实验一实验室基本知识和技术(5)实验二蛋白质浓度测定(双缩脲法)(21)实验三醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质(23)附:电泳技术(27)实验四血浆清蛋白的分离纯化与鉴定(35)附:层析技术(37)实验五胰岛素及肾上腺素对血糖浓度的影响(45)实验六脱氧核糖核酸(DNA)的提取及成分鉴定(48)实验七质粒DNA提取与纯化(51)实验八DNA重组质粒的设计与构建(54)实验九凝集试验(61)实验十肝功能组合实验(65)附1:血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)测定附2:酶联免疫吸附试验(ELISA)实验十一免疫血清的制备(71)实验一实验室基本知识和技术(Thebasicknowledgeandtechnologyoflab)【目的和要求】1.掌握各种基本的生化技术、常用仪器的分类、使用及注意事项2.熟悉生化实验室规则3.清点洗刷实验用具。【实验内容】1.实验室规则2.生物化学实验各种基本技术3.722型分光光度计的使用4.实验记录和实验报告【仪器、设备】1.烧杯2.试管3.刻度吸量管4.离心管5.滴管6.搅棒7.枪式移液器及其配适吸头8.混匀器9.恒温水浴箱10.离心机11.722型分光光度计,721型分光光度计第一部分基本知识与操作一、常用的玻璃仪器(一)分类:常用的玻璃仪器分类有量器和容器,“量器”主要包括:量筒、量杯、容量瓶、吸管等。“容器”主要有烧瓶、烧杯、试管、试剂瓶、离心管等。量器有量入式和量出式两种形式。“量入式”用“TC”、“E”、“λ”表示,定量标记由下往上递增,测量注入量器中的液体;“量出式”用“TD”、“A”表示;定量标记由上而下递增;测量从量器中倾出的液体。(二)玻璃仪器的洗涤、干燥1、洗涤液:①洗洁精,肥皂水,洗衣粉。②玻璃仪器专用洗涤液:主要成份为中性稀氯氧化剂,上海日化研究所出品2、洗涤的要求与步骤:要求:洁净的玻璃器皿表面应不挂任何水滴。步骤:不净的器皿洗衣粉或肥皂水刷洗自来水冲净达到要求?是浸入洗液(数小时至过夜)自来水冲净蒸馏水涮洗2—3次(其目的是去除自来水中的杂质,故应少量多次,全面充分)烤干或晾干、备用注意:对使用过的仪器应养成及时清洗的习惯,特别是血液分析时用以吸取血液样本的吸管,用过后应当立即用水将所沾的血液冲去,否则放置过久,血液干燥硬结,就很不容易清除。①新购置的玻仪:合成洗涤剂洗刷→→0.2mol/L盐酸浸泡(去除游离碱)2―6小时→→自来水冲洗→→DS冲洗2――3次。②一般容器:如试管、烧杯、三角烧瓶等。流水冲洗→→合成洗涤剂洗刷→→自来水多次冲洗→→DS冲洗。③容量分析仪器:如吸管、容量瓶、量筒、滴定管等。使用后立即浸泡水中。自来水多次冲洗→→沥干→→铬酸洗液浸泡数小时→→自来水多次冲洗→→DS冲洗2――3次。(不能刷洗)④比色杯:用毕立即用DS反复冲洗。洗不净时,用盐酸冲洗,再用自来水冲洗和蒸馏水冲洗。避免用碱液或强氧化剂清洗,切忌用试管刷或粗糙纸试擦3、玻璃仪器的干燥一般的玻璃仪器均可洗净后倒置架上,让其水分蒸发自然干燥,如需迅速干燥者应按仪器的不同类型按下述不...