蛋白质各种定量方法的优缺点的比较

蛋白质各种定量方法得优缺点得比较１。蛋白质得常规检测方法1.１ 凯氏(K ｊ elda ｈ l)定氮法一种最经典得蛋白质检测方法。原理:样品中含氮有机化合物与浓硫酸在催化剂作用下共热消化,含氮有机物分解产生氨,氨又与硫酸作用变成硫酸铵。然后加碱蒸馏放出氨,氨用过量得硼酸溶液吸收,再用盐酸标准溶液滴定求出总氮量换算为蛋白质含量。优点:范围广泛、测定结果准确、重现性好缺点:操作复杂费时、试剂消耗量大1。2 双缩脲法常用于需要快速但并不需要十分精确得蛋白质检测。原理:双缩脲(N Ｈ３ＣＯ NHC Ｏ NH3)就是 ３ 分子得脲经 180℃左右加热,放出 1 分子氨后得到得产物。 在强碱性溶液中,双缩脲与硫酸铜形成紫色络合物(肽键中得氮原子与铜离子配价结合),称为双缩脲反应。紫色络合物颜色得深浅与蛋白质浓度成正比,因此可用来测定蛋白质含量。测定范围:１～１ 0mg(有得文献记载为 1～2 ０ mg)优点:较快速,干扰物质少,不同蛋白质产生得颜色深浅相近缺点:① 灵敏度差;② 三羟甲基氨基甲烷、一些氨基酸与Ｅ DTA 等会干扰该反应。1、3 Foli ｎ—酚试剂法原理:Folin—酚法得原理与双缩脲法大体相同,利用蛋白质中得肽键与铜结合产生双缩脲反应。同时也由于 F ｏ lin—酚试剂中得磷钼酸-磷钨酸试剂被蛋白质中得酪氨酸与苯丙氨酸残基还原,产生深蓝色得钼蓝与钨蓝得混合物。在一定得条件下,蓝色深度与蛋白得量成正比,由此可测定蛋白质得含量。 测定范围:２ 0～２ 50u ｇ优点:灵敏度高,对水溶性蛋白质含量得测定很有效缺点:① 费时,要精确控制操作时间; ②Ｆ olin －酚法试剂得配制比较繁琐,且酚类与柠檬酸、硫酸铵、Tris 缓冲液、甘氨酸、糖类、甘油、还原剂(二硫代苏糖醇、巯基乙醇)、EDTA 与脲素均会干扰反应。1.4 紫外吸收法原理:蛋白质分子中得酪氨酸、苯丙氨酸与色氨酸残基使其在 280 ｎｍ 处具有紫外吸收, 其吸光度与蛋白质含量成正比)。此外,蛋白质溶液在 28 ０ n ｍ得吸光度值与肽键含量成正比, 利用一定波长下蛋白质溶液得吸光度值与蛋白质浓度得正比关系可以测定蛋白质含量、优点:简便、灵敏、快速,不消耗样品,测定后能回收。 缺点:① 测定蛋白质含量得准确度较差,专一性差;② 干扰物质多,若样品中含有嘌呤、 嘧啶及核酸等能吸收紫外光得物质,会出现较大得干扰。定氮法、双缩脲法、F ｉ lon-酚试剂法与紫外吸收法为常用得４种古老得经典方法。1.5考马斯亮蓝法原理:染料考马斯亮蓝Ｇ－25 ０...