考点 29 基因工程、蛋白质工程和细胞工程 [直击考纲] 1.基因工程的诞生(Ⅰ)。2.基因工程的原理及技术(含 PCR 技术)(Ⅱ)。3.基因工程的应用(Ⅱ)。4.蛋白质工程(Ⅰ)。5.植物的组织培养(Ⅱ)。6.动物细胞培养与体细胞克隆(Ⅱ)。7.细胞融合与单克隆抗体(Ⅱ)。8.动物胚胎发育的基本过程与胚胎工程的理论基础(Ⅰ)。9.胚胎干细胞的移植(Ⅰ)。10.胚胎工程的应用(Ⅱ)。11.转基因生物的安全性(Ⅰ)。12.生物武器对人类的威胁(Ⅰ)。13.生物技术中的伦理问题(Ⅰ)。14.简述生态工程的原理(Ⅱ)。15.生态工程的实例(Ⅰ)。1．基因工程常考的 3 种基本工具(1)限制性核酸内切酶：识别双链 DNA 分子的某种特定核苷酸序列，并在特定位点上切割DNA 分子。(2)DNA 连接酶：① E·coli DNA 连接酶只能连接黏性末端；② T4 DNA 连接酶能连接黏性末端和平末端。(3)载体：①能在宿主细胞内稳定存在并大量复制；②有一个至多个限制酶切割位点，供外源 DNA 片段(基因)插入其中；③具有特殊的标记基因——以便对含目的基因的受体细胞进行鉴定和选择。2．基因工程的 4 大操作程序 (1)目的基因的获取① 从基因文库中获取。② 利用 PCR 技术扩增a．原理：DNA 双链复制。b．条件：模板 DNA、引物、游离的脱氧核苷酸、热稳定的 DNA 聚合酶。③ 用化学方法直接人工合成。(2)基因表达载体的构建① 基因表达载体模式图② 基因表达载体的构建过程(3)将目的基因导入受体细胞① 导入植物细胞：农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法。② 导入动物细胞：显微注射技术。③ 导入微生物细胞：感受态细胞法(用 Ca2＋处理)。(4)目的基因的检测与鉴定① 插入检测：DNA 分子杂交技术。② 转录检测：DNA—RNA 分子杂交技术。③ 翻译检测：抗原—抗体杂交。④ 个体水平检测：抗性接种实验。3．图解记忆蛋白质工程4．比较记忆植物组织培养与动物细胞培养项目植物组织培养动物细胞培养取材植物幼嫩部位动物胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织过程结果获得植株个体，可以体现全能性新的细胞，不形成个体，不体现全能性条件① 无菌；②营养；③适宜条件① 无菌、无毒；②营养、血清等；③温度和pH；④气体环境：O2、CO25.植物体细胞杂交与单克隆抗体制备过程比较步骤植物体细胞杂交过程单克隆抗体制备过程第一步原生质体的制备(酶解法)正常小鼠免疫处理第二步原生质体融合(物理、化学法)动物细胞融合(物理、化学、生物方法)第三步杂种植株的筛选与培养杂交...
