2025 浙科版选修 1 第一部分《实验一 大肠杆菌的培育和分离》word 素材 4基础知识和操作过程梳理 一、大肠杆菌 细菌是单细胞的原核生物。细菌细胞的结构有细胞壁、细胞膜、细胞质等。细菌无成型的细胞核，细胞壁由肽聚糖组成。由于细菌细胞壁结构不同，细菌可分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两类。革兰氏阳性菌细胞壁厚，无荚膜，多产生外毒素；革兰氏阴性菌细胞壁薄，有荚膜，多产生内毒素。革兰氏阳性菌对青霉素更为敏锐。 大肠杆菌是革兰氏阴性、异养兼性厌氧型肠道杆菌。在肠道中一样对人无害，但任何大肠杆菌进入人的泌尿系统，都会对人体产生危害。大肠杆菌在基因工程技术中被广泛的应用，它的质粒是最常用的运载体，它也是基因工程中常用的受体细胞。 二、培育基配置 微生物生命活动过程中需要的化合物有碳源、氮源、生长因子、无机盐和水。有的化合物既是碳源又是氮源、能源。生长因子是微生物生长不可缺少的微量有机物，但不一定需要外界补充，有的微生物能够自身合成。在提供上述几种要紧营养物质的基础上，培育基还需要满足微生物生长对pH、专门营养物质以及氧气的要求。 我们一样用 LB 液体培育基来扩大培育大肠杆菌，培育后可在 LB 固体培育基上划线分离。以下为本实验中培育基配置步骤： 1．称量：准确称取各成分。蛋白胨 0.5g，酵母提取物 0.25g，氯化钠0.5g，加水 50ml。配置 LB 固体培育基时还需加 1g 琼脂。 2．溶化：加热熔化，用蒸馏水定容到 50mL。配置 LB 固体培育基时还需加琼脂，整个过程持续用玻棒搅拌，目的是防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。 3．调 pH：用 1mol/L NaOH 溶液调剂 pH 至偏碱性。 4．灭菌：在两个 250ml 的三角瓶中分不装入 50ml LB 液体培育基和50ml LB 固体培育基，加上棉塞。将培育皿用牛皮纸包好，放入灭菌锅内，1kg 压力灭菌 15min。 5．倒平板：灭菌后，待固体培育基冷却至 60℃左右时在酒精灯火焰邻近操作进行。其过程是：①将灭过菌的培育皿放在火焰旁，右手拿装有培育基的三角瓶，左手拔出棉塞；②右手拿三角瓶，使三角瓶的瓶口迅速通过火焰；③用左手将培育皿打开一条稍大于三角瓶口的缝隙，右手将培育基倒入培育皿，赶忙盖上皿盖；④待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置。 倒过来放置的目的是防止培育基冷却过程中形成的水滴落到培育基表面。向培育皿中转移已灭菌的培育基时，也不要把培育基沾在皿壁上。否则，空气中杂菌会在这些粘附培育基上繁...
