细胞鉴定中常用的生理生化反应实验报告

细胞鉴定中常用的生理生化反应实验报告生 14 孙晓川 2025011983一、实验目的：1. 了解细菌生理生化反应原理，掌握细菌鉴定中常用的生理生化反应的测定方法。2. 通过不同细菌对不同含碳、含氮化合物的分解利用情况，了解细菌碳、氮代谢类型的多样性。3. 了解细菌在培育基中的生长现象及其代谢产物在鉴别细菌中的意义。4. 学习各种接种技术。二、实验原理：各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养基质的分解能力也不一样，因而代谢产物存在差别。细菌的这种代谢特点可供鉴别细菌之用。用生理生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌的生理生化反应。常用的生理生化反应：1. 糖（醇）类发酵试验：绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源和能源，但不同的细菌对不同糖类的利用能力和方式存在差异。有些细菌能分解某些糖产生有机酸（如乳酸、醋酸、丙酸等）和气体（如氢气、甲烷、二氧化碳等）；有些细菌则只产酸不产气。例如大肠杆菌能分解葡萄糖和乳酸产酸并产气；伤寒杆菌分解葡萄糖产酸不产气，不能分解乳酸；普通变形杆菌分解葡萄糖产酸，不能分解乳酸。在培育基中预先加入溴甲酚紫[pH5.2(黄色)~6.8(紫色)]，当发酵产酸时，培育基由紫色变为黄色；气体的产生则可由培育试管中倒置的杜氏小管中有无气泡来证明。2. 甲基红（M.R.）试验：甲基红实验是用来检测由葡萄糖产生的有机酸，如甲酸、乙酸、乳酸等。有些细菌（如大肠杆菌）分解糖类产生丙酮酸，可进一步反应生成甲酸、乙酸、乳酸等，使甲基红指示剂[pH4.4(红色)~6.2(黄色)]培育基呈现红色；有些细菌（如产气杆菌）在培育早期产生有机酸，但在后期转化为非酸性产物，如乙醇、丙酮酸等，使培育基呈现蓝色。3. V.P.（伏-普）试验：伏-普是用来测定某些细菌利用葡萄糖产生非酸性或中性末端产物的能力。某些细菌（如产气杆菌）分解葡萄糖成丙酮酸，并最终在碱性条件下，被氧化为二乙酰，使培育基变为红色，为 V.P.反应阳性。4. 吲哚试验：某些细菌，如大肠杆菌，能产生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸，产生靛基质(吲哚)，靛基质与对二甲基氨基苯甲醛结合，形成玫瑰色靛基质(红色化合物)。5. 硫化氢试验：某些细菌能分解含硫的氨基酸(胱氨酸、半胱氨酸等)，产生硫化氢，硫化氢与培育基中的铁盐反应，形成黑色的硫化铁沉淀，为硫化氢试验阳性。6. 明胶液化试验：蛋白质和氨基酸一般作为微生物的氮源外，但是当缺乏糖类物质时，它们也可作...