HPLC 操作规程1。所需的流动相，应该用合适的 0.45μm 滤膜过滤。2。样品溶液和标准溶液 ,也应该用合适的 0.45μm 滤膜过滤,滤膜也分为水相和有机相。3。开机顺序:开泵,开检测器,进入色谱工作站。4.泵的启动：用流动相冲洗滤器，再把滤器浸入流动相中，启动泵。打开泵的排放阀，用专用注射器从阀口抽出流动相约 20ml，设置高流速（9ml/min)或用冲洗键 PURGE 进行排气，观查出口处流动相呈连续液流后，将流速逐步回零或停止（STOP)冲洗，关闭排放阀.5 。将流速调节至分析用流速，对色谱柱进行平衡，同时观察压力指示应稳定，用干燥滤纸片的边缘检查柱管各连接处应无渗漏，初始平衡时间，一般约需 30分钟。平衡的标志是泵压不波动和基线平直，说明已经平稳。6. 检测器的开启：开启电源，选择光源（氘或钨）灯，选定检测波长，待预热15 分钟方可用于分析测试。7.压力表无压力显示或压力波动时不能进行分析,应检查泵中气泡是否已排除，各连结处有无漏液，排除故障后方能进行操作。如压力升高，甚至自动停泵，应检查柱端有无污染堵塞,如有堵塞，应该用相应的溶剂清洗.假如清洗不了,可小心卸下开柱的进口螺帽，挖出被污染填冲剂后，补入同类填充剂，认真安装好，再进行操作。8.分析完毕后，先关检测器和色谱工作站,再用适当经过滤和脱气的溶剂清洗色谱系统，正相柱一般用正己烷，反相柱如使用过含盐流动相,则先用水然后用甲醇冲洗，再用分析流速冲洗，各冲洗溶剂一般冲洗 30-60 分钟,特别情况应延长冲洗时间，粗的柱子流速控制在 0。5ml/min 以下,细柱控制在 0。5ml/min 以下。9. 关机顺序：退出化学工作站，接着关检测器，最后关泵。开机顺序刚好和关机顺序相反。HPLC 使用注意事项1. 含水流动相最好在实验前配制，尤其是夏天使用缓冲溶液作为流动相不要过夜，最好加入叠氮化钠，防止细菌生长。2. 气泡会致使压力不稳，重现性差，所以在使用过程中要尽量避开产生气泡。3. C18 柱绝对不能进蛋白样品，血样、生物样品。4. 每次做完样品后应该用溶解样品的溶剂清洗进样器。5. 长时间不用仪器，应该将柱子取下用堵头封好保存,注意不能用纯水保存柱子，而应该用有机相(如甲醇等），因为纯水易长霉。6. 不能用纯乙腈作为流动相，这样会使单向阀粘住而导致泵不进液.7. 更换流动相时应该先将吸滤头部分放入烧杯中边振荡边清洗,然后插入新的流动相中。更换无互溶性的流动相时要用异丙醇过渡一下.8. 不要高压冲洗柱子，不要在高温下...
