植物种苗脱毒技术——茎尖脱毒的实例(一)、茎尖脱毒 1、茎尖脱毒的依据
病毒在植物体内分布是不均一的,越接近生长点约(0
1-1mm 区域),病毒浓度越稀,因此有可能采用小的茎尖离体培养而脱除植物病毒
2、茎尖培养法脱除植物病毒的技术关键 (1)、被脱毒植物携带病毒的诊断及其在体内的分布 脱毒之前,应了解植物携带何种病毒,病毒在体内的分布位置,以确定培养茎尖的大小 (2)、母体植株的选择和预处理 母体的选择: 欲脱毒材料的品种典型性:关系到脱毒以后的脱毒苗是否保持原品种的特征特性 植体健康程度选择:应选感病轻、带毒量少的健康植株作为脱毒的外植体材料,这样更容易获得脱毒株
外植体预处理: (3)、茎尖的剥离 在剥取茎尖时,把茎芽置于解剖镜下(8~40 倍),一只手用镊子将其按住,另一只手用解剖针将叶片和叶原基剥掉,解剖针要常常蘸入 90%酒精,并用火焰灼烧以进行消毒
但要注意解剖针的冷却,可蘸入无菌水进行冷却
当一个闪亮半圆球的顶端分生组织充分暴露出来之后,用解剖刀片将分生组织切下来,为了提高成活率,可带 1-2 枚幼叶,然后将其接到培养基上
接种时确保微茎尖不与其他物体接触,只用解剖针接种即可
剥离茎尖时,应尽快接种,茎尖暴露的时间应当越短越好,以防茎尖变干
可在一个衬有无菌湿滤纸的培养皿内进行操作,有助于防止茎尖变干
将接种好的茎尖置于 25℃左右的温度下
每天以 16 小时 2000-3000lx 的光照条件下培养
由于在低温和短日照下,茎尖有可能进入休眠;所以较高的温度和充足的日照时间必须保证
微茎尖需数月才能成功
继代培养得到足够的检测苗、进行病毒检测
(4)、脱毒效果检测 A 指示植物鉴定(indicator test plants) 所谓指示植物是指具有能够辨别某种病毒的专化性症状的寄主植物
每种病毒都有自己敏感的植物,例如: 马铃薯病毒的敏感植物