第7页共7页编号：时间：2021年x月x日书山有路勤为径，学海无涯苦作舟页码：第7页共7页中药有效成分及其类似物对乙酰胆碱酯酶的抑制作用研究鲍雅丹马林*中山大学化学与化工学院有机化学研究所，广州51027摘要本研究对从中药提取的有效成分及合成的一系列类似物进行了抑制乙酰胆碱酯酶的活性测试.发现具有苯环或共轭结构的化合物对乙酰胆碱酯酶有显著的抑制作用，特别是吲哚喹啉化合物19c的抑制效果最好(IC50=4.8μM)，可以作为治疗阿尔茨海默氏病的先导药物。关键词乙酰胆碱酯酶抑制剂IC50动力学阿尔茨海默氏病(Alzheimer’sdisease,AD)是常见的一种中枢神经系统退行性病变，发病率较高。主要临床表现为记忆、智力和识别功能的不同程度的减退或丧失,目前临床上用于改善AD患者认知障碍的药物主要是乙酰胆碱酯酶抑制剂。在大规模、多中心、双盲和安慰剂的对照试验中,这类化合物对AD病人认知能力及生活质量均有统计学显著改善。美国Warnerlamber公司开发的他克林(tacrine)[1]是一种乙酰胆碱酯酶的非竞争性抑制剂,1993年经FDA批准上市,成为第一个用于治疗AD的AChE剂类药物。此后又有数种AChE抑制剂经FDA批准上市或进入临床试验,如Velnactine、Amiridine等。但它们均有不同程度的毒副作用,这些毒副作用严重影响了它们在临床上的应用,这使得有必要开发疗效高毒副作用更小的AChE抑制剂。乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE,EC3.1.1.7.)的主要生理功能为通过快速水解神经传递介质乙酰胆碱（ACh），中止胆碱能突触中的脉冲传递，故AChE又称乙酰胆碱水解酶(acetylcholinehydrolase)[2]。CH3COOCH2CH2N+(CH3)3+AChECH3CO-AChE+HOCH2CH2N+(CH3)3CH3COO-+H++AChE为了筛选出高效、低毒的AChE抑制剂，我们参考各种AChE抑制剂的结构类型，研究了从中药山芝麻和筋骨草分离出的有效成分及其类似物对AChE的抑制作用。*基金项目：中山大学化学与化工学院第三届创新化学实验基金项目（批准号：02002）资助第一作者：鲍雅丹（1980年出生），女，中山大学化学与化工学院材料化学专业99级指导教师：马林Email：cesmal@zsu.edu.cn第8页共7页第7页共7页编号：时间：2021年x月x日书山有路勤为径，学海无涯苦作舟页码：第8页共7页1实验部分1.1材料与仪器乙酰胆碱酯酶(Acetylcholinesterase,AChE,EC3.1.1.7.)、硫代乙酰胆碱(Acetylthiocholine)、5,5-二硫代双(2-硝基苯甲酸)(DTNB)购于Sigma公司；其它试剂为分析纯试剂，未经进一步纯化。主要测试仪器：UV-2501PC型紫外光谱仪、OrionModel720A型pH计、Guntw28恒温水浴锅。1.2方法1.2.1抑制剂的制备：全合成化合物19(a-j)由本实验室周金林博士提供；化合物1-18由郭新东博士提供从中药山芝麻和筋骨草中分离的有效成分，结构如下：1234567891011121314151617181.2.2化合物对乙酰胆碱酯酶的抑制活性测定取5支1.5mL分别装有840L0.1MpH8.0磷酸盐缓冲溶液的梨型管，依次加入0，5，10，20，35，50L1.0mM的样品DMSO溶液，并用DMSO补齐至总体积为890第9页共7页第8页共7页编号：时间：2021年x月x日书山有路勤为径，学海无涯苦作舟页码：第9页共7页L。分别加入50L4mg/mL5,5-二硫代双(2-硝基苯甲酸)和10L乙酰胆碱酯酶溶液（0.1mg/ml），并在37℃保温15min。立即加入50μL2mg/mL硫代乙酰胆碱溶液，摇匀后测其在λ=412nm处的A值(An)。参比用0.1MpH8.0磷酸盐缓冲溶液。以未加样品所测得的Acontrol值作为100个活力单位：相对酶活力＝(An/Acontrol)×100然后以酶的相对活力对抑制剂浓度作图，根据抑制曲线求得各种化合物的IC50值（抑制酶活力50％时的抑制剂浓度）。1.2.3乙酰胆碱酯酶的抑制动力学测定取5支1.5mL分别装有840，855，865，880，885L0.1MpH8.0磷酸盐缓冲溶液的梨型管，加入一定量的样品溶液，并用DMSO补齐至总体积的5％。分别加入50L4mg/mL5,5-二硫代双(2-硝基苯甲酸)和10L乙酰胆碱酯酶溶液，并在37℃保温15min。立即分别加入50，35，25，10，5L2mg/mL硫代乙酰胆碱溶液，摇匀后测其在λ=412nm处的时间扫描曲线。曲线的斜率即为反应的初速度[V]，然后以1/[V]对1/[S]作图，以不加抑制剂的为控制线。2结果与讨论2.1吲哚喹啉生物碱衍...
