专题十六基因工程和细胞工程1.基因工程的诞生(Ⅰ)2.基因工程的原理及技术(含PCR)(Ⅱ)3.基因工程的应用(Ⅱ)4.蛋白质工程(Ⅰ)5．植物的组织培养(Ⅱ)6.动物的细胞培养与体细胞克隆(Ⅱ)7.细胞融合与单克隆抗体(Ⅱ)1．关于基因工程的3个误区(1)误认为只能用同一种限制酶切割质粒和含有目的基因的片段。其实可以用不同限制酶切割，只要二者切割后产生相同黏性末端即可。(2)误将目的基因导入受体细胞当作基因工程成功的标志。基因工程是否成功表现在目的基因是否成功表达。(3)误认为启动子就是起始密码子，终止子就是终止密码子。启动子和终止子位于DNA分子上，其作用和转录有关，起始密码子和终止密码子位于RNA上，其作用与翻译有关。2．关于细胞工程的2个误区(1)误认为原生质体的制备是原生质体融合。原生质体的制备是用纤维素酶和果胶酶处理植物细胞，使植物细胞壁去掉，而获得原生质体；而原生质体融合是指去壁的植物细胞融合。(2)不能正确区分杂种细胞、重组细胞和杂交细胞。①杂种细胞：植物体细胞杂交过程中，两种细胞去除细胞壁之后形成的原生质体融合，融合的原生质体形成细胞壁之后形成的细胞叫杂种细胞。②重组细胞：体细胞的细胞核移植到去核卵母细胞之后形成的细胞叫重组细胞。③杂交细胞：动物细胞融合形成的细胞常称为杂交细胞。考点一基因工程(2016·高考全国卷乙，40)某一质粒载体如图所示，外源DNA插入到Ampr或Tetr中会导致相应的基因失活(Ampr表示氨苄青霉素抗性基因，Tetr表示四环素抗性基因)。有人将此质粒载体用BamHⅠ酶切后，与用BamHⅠ酶切获得的目的基因混合，加入DNA连接酶进行连接反应，用得到的混合物直接转化大肠杆菌。结果大肠杆菌有的未被转化，有的被转化。被转化的大肠杆菌有三种，分别是含有环状目的基因、含有质粒载体、含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌。回答下列问题：(1)质粒载体作为基因工程的工具，应具备的基本条件有____________________________(答出两点即可)，而作为基因表达载体，除满足上述基本条件外，还需具有启动子和终止子。(2)如果用含有氨苄青霉素的培养基进行筛选，在上述四种大肠杆菌细胞中，未被转化的和仅含环状目的基因的细胞是不能区分的，其原因是__________________________________________________；并且____________和______________的细胞也是不能区分的，其原因是______________________________________________。在上述筛选的基础上，若要筛选含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌单菌落，还需使用含有________的固体培养基。(3)基因工程中，某些噬菌体经过改造后可以作为载体，其DNA复制所需的原料来自________。【解析】(1)作为运载体的质粒上应有一个至多个限制酶切割位点，在细胞中能够自我复制，且含有特殊的标记基因。(2)未被转化的大肠杆菌和仅含环状目的基因的大肠杆菌中均未导入质粒载体，而质粒上含有氨苄青霉素抗性基因，因此这样的大肠杆菌在含有氨苄青霉素的培养基中不能生长。含有质粒载体和含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌中都含有氨苄青霉素抗性基因，二者在含有氨苄青霉素的培养基中都能生长，因此无法区分二者。根据题图，用BamHⅠ切割质粒后将四环素抗性基因破坏，因此可将经氨苄青霉素培养基筛选出的菌落置于含有四环素的培养基上再次筛选，能在含四环素培养基上生存的是含有质粒载体的大肠杆菌，不能生存的是含有插入目的基因的重组质粒的大肠杆菌。(3)噬菌体为病毒，经改造后作为载体时，其DNA复制所需原料来自受体细胞。【答案】(1)能自我复制、具有标记基因(2)二者均不含有氨苄青霉素抗性基因，在该培养基上均不生长含有质粒载体含有插入了目的基因的重组质粒(或答含有重组质粒)二者均含有氨苄青霉素抗性基因，在该培养基上均能生长四环素(3)受体细胞1．获取目的基因的3种途径(1)从基因文库中获取。(2)PCR技术扩增①PCR原理：DNA复制原理。②需要条件：模板DNA、引物、四种脱氧核苷酸、热稳定DNA聚合酶(Taq酶)。③过程：DNA受热变性解旋为单链、冷却后RNA引物与单链相应互补序列结合，然后在DNA聚合酶作用下延伸合成互补链。(3)化学方法人工合成。2．基因表达载体的组成...
