第一章第二节微生物的纯培养第二章活动目标进行微生物分离和纯化的基本操作。实验原理微生物的分离与纯化就是将待检测微生物样品通过划线或涂布接种在固体培养基上，样品中的每一个细胞或抱子都可以生长繁殖形成单个菌落。将单个菌落接种到斜面培养基上，经培养后，即可得到一个微生物的纯种。材料用具培养16～24h的大肠杆菌(E.coli)培养液;灭菌的牛肉膏蛋白陈琼脂培养基斜面和平板，盛有9mL无菌水的试管;无菌玻璃涂棒，无菌吸管，接种环等。方法步骤1.微生物的分离微生物的分离包括样品稀释、划线或涂布及培养三个步骤(图1-8)。(1)稀释用1mL无菌吸管吸取1mL大肠杆菌培养液，加入到盛有9mL无菌水的大试管中，充分混匀，然后用无菌吸管从此试管中吸取1mL加入另一支盛有9mL无菌水的试管中，混和均匀，依次类推制成10-1,10-2,10-3,10-4,10-5,10-6系列稀释度的大肠杆菌稀释液。(2)划线或涂布平板划线分离法在近火焰处，左手拿皿底，右手拿接种环，挑取大肠杆菌培养液一环在平板上划线，常用的划线方法有平行划线和连续划线两种(图1-9)。平行划线时，每转一个角度烧一次接种环。划线完毕后，盖上培养皿盖，做好标记。划线时应注意什么?涂布分离法取3个平板，底面分别用记号笔写上10-4,10-，和10}三种稀释度，然后用无菌吸管分别吸取相应稀释度的稀释液各0.1mL，放入已标记好的平板上，用无菌玻璃涂棒在培养基表面轻轻地涂布均匀，室温下静置5～l0min，使菌液吸附进培养基。(3)培养将划线或涂布接种的平板倒置于培养箱或温室中37℃培养16～24h，即可长出单个菌落。2.接斜面分别从培养后长出的单个菌落上挑取少许细胞，接种到斜面培养基上(图1-11)，置培养箱或温室37℃培养24h，斜面上菌种长好后，4℃保存备用。根据实验操作过程写出实验报告，讨论以下问题:1.你所做的平板划线分离法或涂布分离法是否较好地得到了单菌落?如果不是请分析原因。2.平行划线时，每转一个角度烧一次接种环，为什么要这样做?3如果用牛肉膏蛋白脉培养基分离一种对青霉素具有抗性的细菌，你认为应如何做?分离和纯化微生物是微生物技术的重要操作方法。微生物种类不同，对培养基和生长条件等要求也不一样。一般根据微生物对营养物质、pH、氧气等要求的不同，供给它们适宜的生活条件，或加入某种抑制剂，造成只利于要分离的微生物生长、不利于其他微生物生长的环境，从而淘汰不需要的微生物，分离得到需要的微生物纯种。微生物工作者在长期科研和生产实践中积累了宝贵的经验，创造了很多适合分离和纯化不同类群微生物的方法。自1880年科赫发明微生物的分离与纯化技术以来，该技术在获得丰富的微生物资源以及在工、农、医、环境和动植物细胞培养等方面作出了巨大的贡献。由此可见，一项微生物学新实验新技术的建立，会对整个生命科学带来革命性的变化。随着分子生物学的发展和其他学科的相互渗透，微生物的分离鉴定技术将获得新的突破。.
