硫酸化酵母葡聚糖体外和体内对大肠杆菌抑制作用的比较摘要：以酵母碱不溶性葡聚糖为原料，硫酸为酯化剂，在尿素-二甲基亚砜溶液中进行硫酸酯化反应得到易溶于水的白色硫酸化葡聚糖。利用得到的硫酸化葡聚糖进行体外和体内抑制大肠杆菌效果研究。体外抑菌实验结果表明：硫酸化葡聚糖在体外对大肠杆菌的生长没有抑制作用。小鼠活体实验显示：硫酸化葡聚糖能显著提高大肠杆菌致腹膜炎的小鼠的成活率。关键词：酵母葡聚糖；硫酸化；硫酸化葡聚糖；抑菌；大肠杆菌ComparisonoftheInhibitionEffectsofSulfatedGlucanonE.coliinVitro&inVivoAbstract:Alkali-insolubleβ-glucanwasusedasrawmaterialstoproducewater-solublewhitesulfatedglucanbysulfuricesterificationinurea-DMSOsolutionwithsulfuricacidasesterifyingagent.ThentheinhibitioneffectsoftheproducedsulfatedglucanonE.coliinvitroandinvivowerestudied.ItsbacteriostasisinvitroshowedthatitcouldnotinhibitthegrowthofE.coliinvitro.InvivoexperimentsinmicesuggestedthatsulfatedglucancouldsignificantlyenhancethesurvivalrateofmicewithperitonitisinducedbyE.coli.Keywords:β-glucan;sulfated;sulfateddextran;bacteriostasis;E.coli酵母碱不溶性葡聚糖是一种以β-1，3为主链并伴以间或的β-1，6侧链的天然高分子聚合物，具有多种免疫刺激活性，能够通过刺激免疫系统对生物反应进行修饰，保护机体免受异物的感染，增强机体的免疫能力，抑制肿瘤，抗氧化和促进伤口愈合等作用[1-3]，是一种重要的生物效应应答剂（biologicalresponsemodifiers,BRM）。但由于酵母碱不溶性葡聚糖难溶于水，其应用受到了很大限制。因此增加其水溶性是一个急需解决的问题，增溶的主要方法有酸解、酶解、超声波、热变性和化学修饰。其中化学修饰法是比较常用的一种方法，而硫酸化是葡聚糖化学修饰的一个重点。修饰后的硫酸化葡聚糖同样具有免疫增强活性，且其水溶性明显优于葡聚糖，能够扩展葡聚糖作为免疫活性增强剂的应用范围，开发前景十分广阔。本文以酵母碱不溶性葡聚糖为原料，硫酸为酯化剂，在尿素-二甲基亚砜溶液中进行硫酸酯化反应得到易溶于水的白色硫酸化葡聚糖。并对其在体外和体内对大肠杆菌的抑制作用进行了研究和比较。1材料与方法1.1碱不溶性酵母葡聚糖制备[4]称取干燥的酵母细胞壁粗提物100g，加入3%的氢氧化钠溶液600mL，搅拌均匀，将混合物置于75℃水浴中加热3h，冷却至室温，4000r/min离心10min，沉淀物水洗两遍。水洗过的沉淀物，加入3%的氢氧化钠溶液400mL，混合均匀后置于100℃条件下处理2h，冷却至室温，4000r/min离心10min，重复水洗2次。沉淀用丙酮处理，4000r/min离心10min，重复用丙酮洗涤2次，置于40℃干燥，得到酵母不溶性葡聚糖。1.2供试菌种和动物大肠杆菌（E.Coli）,由天津科技大学菌种保藏中心提供。ICR/HSD小鼠，约重18g，购自中国人民解放军军事酿酒科技2010年第3期（总第189期）·LIQUOR－MAKINGSCIENCE＆TECHNOLOGY2010No．3(Tol．189)37酿酒科技2010年第3期（总第189期）·LIQUOR－MAKINGSCIENCE＆TECHNOLOGY2010No．3(Tol．189)医学院实验动物中心。酵母细胞壁粗提物，由安琪酵母股份有限公司提供。1.3培养基细菌培养基：牛肉膏5g、蛋白胨10g、NaCll5g、琼脂20g、水1L、pH7.2～7.4,121℃灭菌20min。1.4主要试剂及设备氢氧化钠、丙酮、浓硫酸、二甲基亚砜均为分析纯。油浴恒温振荡器，PL403电子天平，DL-5000B大容量离心机，80mm-G6过滤漏斗，透析袋，D-37520真空冷冻干燥机（德国MartinChrist），722-S型可见分光光度计，WQF-510傅立叶变换红外光谱仪。1.5硫酸化葡聚糖的制备[5]准确称取酵母β-D-葡聚糖2.0g溶于含36g尿素的50mL二甲基亚砜中，搅拌溶解，边搅拌边缓慢滴加50mL含5mL浓硫酸的二甲基亚砜混合液。然后，置于100℃的油浴恒温振荡器中，在100r/min的转速下进行酯化反应。反应4h后，将反应液快速冷至室温，并加去离子水至2L。稀释后的溶液5000r/min离心10min，所得上清液用G6的沙芯漏斗（1.2～2μm）过滤以除去未反应的酵母葡聚糖微粒。过滤后的溶液装入透析袋用超纯水透析，共透析5d...
