第1页共41页编号：时间：2021年x月x日书山有路勤为径，学海无涯苦作舟页码：第1页共41页第一部分神经生物学的形态学研究方法一、研究神经细胞的形态及细胞构筑的方法（一）尼氏（Nissl）染色法原理用碱性染料染神经组织常用染料焦油紫、硫堇、中性红结果尼氏小体被染色，背景无色。用途皮质的分层、分区、脊髓灰质的分层、核团的分区、细胞的构筑（二）高尔基（Golgi）镀银染色法原理铬银与脂蛋白形成复合物，在细胞膜系统的间隙内形成结晶结果整个细胞为黑色用途显示整个细胞的全貌二、研究神经径路的方法（一）溃变法原理神经元胞体或纤维损伤后远侧部分发生顺行变性（纤维交替膨胀和狭窄，呈念珠状继而呈颗粒状），可用镀银法显示或电镜观察。胞体发生逆行变性（胞体内色质溶解，胞体肿胀，核偏向胞体的一边），可用尼氏法显示。第2页共41页第1页共41页编号：时间：2021年x月x日书山有路勤为径，学海无涯苦作舟页码：第2页共41页应用研究纤维联系。（二）辣根过氧化物酶（HRP）标记法原理HRP注入神经组织或脏器—逆行、顺行、过节标记—H2O2、色原酶反应—呈色试剂HRP：1.游离HRP2.结合HRP(WGA-HRP、CT-HRP）色原：1.二氨基联苯胺(DAB)2.二盐酸联苯胺(BDHC)3.邻-联茴香胺(OD)4.四甲基联苯胺(TMB)稳定剂:硝普钠、钨酸钠用途研究脏器的神经支配、中枢内核团间的联系等。还可与免疫组织化学、电镜技术等结合。（三）荧光素轴突逆行传递标记法原理将荧光物质注射至神经元的轴突分布区,经分支的末梢吸收后，循轴突逆行输送至胞体。在荧光显微镜下可看到胞体内呈现荧光标记物。荧光素FurogoldFB-NYGB-NYTB-BbPI-BbEB-DAPA应用研究神经元的轴突分支至不同部位的投射。（四）放射自显影示踪技术第3页共41页第2页共41页编号：时间：2021年x月x日书山有路勤为径，学海无涯苦作舟页码：第3页共41页原理将放射性同位素3H等标记的氨基酸导入神经组织，氨基酸被神经元摄取后在胞体内合成蛋白质，沿轴突顺行运输，分布于整轴突和末梢，同位素产生的核射线使照相乳胶感光，根据感光银粒所在部位和黑度判断放射性示踪剂的位置和数量，从而确定神经纤维的路径。示踪剂3H-脯氨酸标记终末、跨突触标记3H-亮氨酸标记终末、纤维3H-HRP酶蛋白与HRP结合双标记用途研究神经元的传出路径（五）2-脱氧葡萄糖放射自显影法原理2-DG能与葡萄糖竞争和6-磷酸葡萄糖异构酶结合，但不能转化为相应的磷酸果糖，因此滞留在细胞中。将2-DG标记上放射性同位素，就可追踪中枢神经系统中各种神经结构的代谢率。结果在感光底片上，代谢率较高的核团和区域银粒较密。用途显示处于兴奋状态的神经元链。（六）植物凝集素标记法原理凝集素通过神经细胞膜上不同受体的介导而被胞饮入神经元内，经轴突运输至一定部位，再用免疫组化的方法显示。凝集素麦芽凝集素（WGA）可与HRP、荧光素结合菜豆凝集素（PHA-L）第4页共41页第3页共41页编号：时间：2021年x月x日书山有路勤为径，学海无涯苦作舟页码：第4页共41页用途顺行或逆行追踪，研究神经通路。（七）葡聚糖胺结合生物素原理葡聚糖胺结合生物素(BDA)被胞饮入神经元内，经轴突运输至一定部位，再用组化反应或荧光显微镜显示。用途顺行追踪，研究神经通路。（八）病毒标记法原理活病毒导入神经元，增殖，顺次进入各级神经元，用免疫组织化学显示。病毒疱疹病毒（单纯疱疹病毒Ⅰ型、猪疱疹病毒）弹状病毒用途跨突触标记（顺向或逆向）近年来，用分子生物学方法制作基因重组病毒。将绿色荧光蛋白（GFP）的基因整合入病毒，通过病毒增值，GFP在感染的神经元中表达。在荧光显微镜下观察GFP基因重组病毒在单个神经元范围内顺行或逆行标记，可显示神经元全貌，与Golgi法相似。三、研究神经肽分布的方法（一）黄递酶组织化学原理尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸-黄递酶（NADPH-d）是神经型一氧化氮合成酶(nNOS)的辅酶，两者高度共存。可将底第5页共41页第4页共41页编号：时间：2021年x月x日书山有路勤为径，学海无涯苦作舟页码：第5页共41页物B-NADPH氧化成B-NADP，释放H2，使显色试剂硝基四氮唑蓝(NBT）还原成DBT,黄色变成蓝色或紫蓝色。用途研究周围及中枢神经系统nNOS神经元。（二）诱发...
