细胞凋亡在雷公藤甲素所致大鼠急性肾损伤中的作用及其发生机制一．雷公藤/雷公藤多苷片/雷公藤甲素1.雷公藤：雷公藤为卫茅科植物雷公藤(TripterygiumwilfordiiHook．F)的根叶及花，又名黄藤断肠草，肾经现代药理研究表明，雷公藤具有抗炎，镇痛，抗肿瘤及免疫调节等作用，常用于皮肤炎症，免疫调节，肾脏疾病及呼吸系统疾病的治疗。雷公藤主要含有雷公藤碱，雷公藤次碱，雷公藤宁碱，雷公藤晋碱等生物碱，此外还含二萜类，三萜类，倍半萜类及卫矛醇，卫矛碱等，其中二萜类和生物碱类是主要活性成分。2.雷公藤多苷片：雷公藤多苷片为雷公藤的“氯仿--甲醇提取物”，是将雷公藤根部去皮后用乙醇提取，经氯仿萃取，再经硅胶柱以氯仿-甲醇梯度洗脱精制而成的一类有效成分，系极性很大的脂溶性成分的混合物。其所包含的二萜内酯，生物碱，三萜等成分协同作用，既保留雷公藤生药的免疫抑制等作用，又去除了许多毒性成分。3.雷公藤甲素：雷公藤甲素是雷公藤主要活性成分（二萜类）之一，又名雷公藤内酯醇。二．雷公藤药理及临床作用1.药理作用:1)对免疫系统的影响2）抗炎作用3）抗肿瘤作用4）抑制生育5）对泌尿系统的影响：雷公藤在临床上常用于治疗多种肾脏疾病，减轻患者尿中的总蛋白和白蛋白等，雷公藤的这种作用可能与其具有防止破坏和修复肾小球滤过膜涎蛋白，维持滤过膜阴电荷屏障的完整性，减少蛋白的排出有关。6）其他：抗菌，杀菌，解热镇痛，改善微循环等。2.临床应用1）治疗免疫性疾病2）治疗肾脏疾病NS紫癜性肾炎乙型肝炎病毒相关性肾炎难治性狼疮性肾炎3）治疗皮肤疾病红斑狼疮等三．雷公藤的不良反应1.神经系统发生率2.4%，可引起神经细胞变性，出现中枢神经损伤。2.心血管系统发生率4.9%，大剂量的药物可引起起心肌多发性微小肌溶灶形成，灶内心肌纤维肿胀，分离或溶解，线粒体游离于分散的心肌纤维间。3.血液系统发生率3.5%，对骨髓有抑制作用，对更新较快的的组织和细胞有明显的细胞毒作用。4.泌尿系统和生殖系统发生率22.8%，最严重的不良反应是急性肾损伤，急性肾衰竭。口服雷公藤制剂2周以上能影响男性精子，的活力，出现精子数目减少，超过6个月可引起睾丸体积缩小，性欲减退。5.消化系统发生率35.8%。6.皮肤粘膜反应发生率10%，皮肤瘙痒糜烂溃疡斑丘疹荨麻疹等。四．雷公藤导致的急性肾损伤？五．细胞凋亡的检测方法（一）.形态学检测光镜荧光显微镜共聚焦激光显微镜电子显微镜（二）.生化和分子生物学检测（BandC均是“光学技术”）A.DNA梯度图谱钙镁依赖性核酸酶进入核小体间切割DNA，产生180-200bp或其倍数的核小体片段，在凝胶电泳上表现为梯形电泳条带（DNAladder）。B.原位末端转移酶标记技术(荧光标记法and酶标记法)细胞凋亡中，染色体DNA双链断裂或单链断裂，产生大量的粘性3’-OH端，可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT）的作用下，将dXTP和荧光素/碱性磷酸酶/生物素的衍生物标记到3’-OH端，则可在原位特异性地显示出凋亡细胞，从而可进行凋亡细胞的检测，这类方法称为TUNEL（TdT介导的缺口末端标记法）。对完整的凋亡细胞及凋亡小体进行原位染色，能准确地反映细胞凋亡的生物化学及形态特征，可用于石蜡包埋切片，冰冻切片，培养的细胞和从组织中分离的细胞的形态测定。该法操作简单，省时，敏感性可靠。主要应用的是荧光标记法和酶标记法。C.酶学检测利用核小体进行的酶学检测细胞凋亡时，由于钙镁依赖性核酸酶进入核小体间切割DNA，产生180-200bp或其倍数的核小体片段，而核小体由于与组蛋白形成紧密复合物而不被内切核酸酶切割。利用核小体进行的酶学检测而建立起ELISA，应用小鼠抗DNA和抗组蛋白抗体的单抗，与核小体片段形成夹心结构，可特异性地检测细胞溶解物中的核小体片段。（三）.流式细胞仪检测（四）.凋亡相关分子检测A.Caspase分子的检测天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶Caspase家族蛋白是细胞内执行凋亡过程中最关键的环节之一，多数Caspase正常以非活化形式存在，其分子中有2个位点被天门冬氨酸蛋白酶切割后形成3个亚基单位，其中N端的亚单位参与活性Caspase的形成，其余2个亚单位形成多聚体发挥活性作用。Caspase-8和Caspase-3在Caspase...
