动物细胞组织培养VIP专享VIP免费

第4章动物细胞与组织培养4.1动物细胞的特点（1）动物细胞比微生物细胞大，无细胞壁。（2）动物细胞倍增时间长，生长缓慢，易受污染。（3）培养过程需氧量少，对机械搅拌或剪切力敏感。（4）动物细胞间主要以聚集体形式存在。（5）原代细胞一般繁殖50代左右即退化死亡。（6）动物细胞对于营养要求更加苛刻，一般需要血清。（7）动物细胞对于培养环境极其敏感，包括pH值、溶解氧、温度、剪切力等。（8）细菌、真菌、病毒、支原体均可导致动物细胞培养物的污染。（9）绝大多数哺乳动物只有贴附在固体或半固体的表面才能生长。4.2动物细胞与组织培养的名词术语4.2.1动物细胞与组织培养定义动物细胞与组织培养：是从动物体内取出细胞或组织，模拟动物体内的生理环境，在无菌、温和丰富的营养条件下，使离体细胞或组织生存、生长并维持结构和功能的技术。4.2.2体外培养种类（培养层次）细胞培养组织培养器官培养4.2.3原代培养与传代培养体外培养可分为原代培养（亦称初代培养）和传代培养（亦称继代培养）原代培养（primaryculture）：是指将机体取出的细胞或组织进行初次实效培养的过程。实效培养的细胞大约增殖10代左右，这样的细胞称为原代细胞（primarycell）。原代细胞生长分裂并不旺盛，性状与体内细胞很相似，此类细胞适合用作药物检测的材料。传代培养（subculture）：从原代培养的细胞继续转接培养称为传代培养。持续传代的细胞称为传代细胞（subculturecell）。传代细胞因分裂增殖旺盛，能保持细胞一致的二倍体核型。4.2.4细胞系（cellline)细胞系：由初代培养产生的能进行无限次传代培养的细胞群即传代细胞，称为细胞系。但是，体外动物细胞在形态结构上均程度不同地与原来的细胞有所差异。4.2.4细胞株（cellstrain)从原代培养或细胞系获得的具有特定性质或标志,并在随后培养期间始终保持其特性的细胞。4.3发展历史动物组织培养的先河：动物细胞（组织）培养技术起源于19世纪所应用的某些胚胎学技术。动物细胞（组织）培养的奠基人是美国生物学家哈里森。在1907年采用盖玻片覆盖凹窝玻璃悬滴培养法将蛙胚的神经组织培养在淋巴液中，保持存活了几周时间，并观察到细胞突起的生长过程。培养器具：法国学者卡勒尔功不可没。他设计的卡氏培养瓶，自1923年用于培养鸡胚的心肌组织取得成功。培养基：20世纪40年代以后，从事动物组织培养的各国科学家把研究的重点集中在培养基的改造上。1951年，厄尔利等人开发了供动物细胞体外培养的培养基。动物细胞基因工程：20世纪80年代以后，随着基因工程技术和细胞融合技术的迅速发展，已经能够把特定的外源基因通过PCR技术扩增几千倍，并可转染到动物细胞内，使其得到高质量的表达。应用领域近年来，已经启用了300升和1000升的培养罐分别用于生产单克隆抗体和灰色脊髓炎疫苗。此外人体器官的培养为器官移植开辟了一条途径。4.4动物细胞培养的生长类型根据体外培养的细胞，能否贴附在培养容器上生长的特性，主要分为以下两种：贴附生长的细胞非贴附生长的细胞（悬浮型细胞）4.4.1贴附型细胞4.4.1.1贴附型细胞的定义细胞在培养时能贴附在支持物的表面生长，即只有依赖于贴附才能生长的细胞称为贴附型细胞。贴附生长本是大多数有机体细胞在体内生存和生长发育的基本存在方式。贴附有两种含义：一是细胞之间相互接触；二是细胞与细胞外基质之间的相互接触。动物细胞培养中，大多数哺乳动物细胞是必须附壁即附着在固体表面生长，当细胞布满表面后即停止生长，这时若取走一片细胞，存留在表面上的细胞就会沿着表面生长而重新布满创面。4.4.1.2培养细胞贴壁后形态演变过程圆球形细胞放射延展细胞（扁平形态的细胞）极性细胞（纺锤形、三角形、不规则多角形）4.4.1.3体外培养细胞形态类型根据体外培养细胞在支持物上贴附生长时的形态，大致分为四种类型成纤维型细胞（A）上皮型细胞（B）游走型细胞（C）多形型细胞（D）（一）成纤维细胞型细胞外形与体内成纤维细胞形状相似，细胞大致呈梭形或不规则形。前者贴壁后呈长梭形，圆形细胞核位于中央，胞质外伸出2－3个长短不同的突起，生长时呈放射状、漩涡状走向。多数细胞之间排列疏散，有较大的细胞间...