第三章细胞工程的技术根底1第一页，共四十八页。第一节根本设备第二节根本技术2第二页，共四十八页。第一节根本设备一设备与器材二器材处理3第三页，共四十八页。一、设备与器材●大型设备类：无菌室、超净工作台、无菌箱、CO2培养箱、倒置显微镜、实体镜、高速离心机、超速低温离心机、冰箱、超低温冰箱、液氮装置。4第四页，共四十八页。5第五页，共四十八页。6第六页，共四十八页。培养箱7第七页，共四十八页。8第八页，共四十八页。9第九页，共四十八页。光照培养室10第十页，共四十八页。11第十一页，共四十八页。显微镜室12第十二页，共四十八页。13第十三页，共四十八页。14第十四页，共四十八页。15第十五页，共四十八页。16第十六页，共四十八页。17第十七页，共四十八页。18第十八页，共四十八页。19第十九页，共四十八页。●消毒灭菌设备：蒸汽压力消毒器、电热枯燥箱、过滤除菌装置、离子发生器、耐酸耐碱容器、吸管自动冲洗器、超声波清洗器；20第二十页，共四十八页。灭菌室21第二十一页，共四十八页。22第二十二页，共四十八页。23第二十三页，共四十八页。24第二十四页，共四十八页。25第二十五页，共四十八页。●配液用具：水纯化装置、离子交换树脂装置、电子天平、磁力搅拌器、蒸发器等；●制备、培养、保存细胞用品：解剖器具、80～200目尼龙网或不锈钢网、血细胞计数板、培养器皿、细胞培养板〔不同孔数〕、涡流混悬器、恒温水浴振荡器、细胞冻存管、玻璃安瓿、真空低温枯燥器、厚质玻璃容器等。26第二十六页，共四十八页。27第二十七页，共四十八页。28第二十八页，共四十八页。29第二十九页，共四十八页。30第三十页，共四十八页。31第三十一页，共四十八页。32第三十二页，共四十八页。33第三十三页，共四十八页。34第三十四页，共四十八页。35第三十五页，共四十八页。二、器材处理玻璃器皿的清洗：浸泡→刷洗→浸酸→冲洗橡胶用品的处理：冲洗→碱煮→冲洗→浸酸→冲洗→蒸煮●清洗除菌滤器的处理：高压灭菌塑料器皿的清洗：冲洗→碱浸→冲洗→酸浸→冲洗→漂洗金属器械的清洗：汽油→去脂→洗净→酒精擦→蒸煮或高压灭菌●包装：包装纸、牛皮纸、硫酸纸、棉布、铝饭盒、玻璃等，防止消毒后再污染；●消毒灭菌：干烤、高压蒸汽灭菌、滤过除菌、紫外线、γ射线、〔甲醛〕熏蒸消毒、化学消毒剂、抗生素消毒灭菌。36第三十六页，共四十八页。一、无菌技术1.各种灭菌方法及其适用范围A湿热灭菌法〔高压蒸汽灭菌法、常压蒸汽灭菌法、间歇灭菌法〕B干热灭菌法〔火焰灭菌、干热灭菌〕C电离辐射灭菌D紫外线杀菌E过滤除菌F化学杀菌G熏蒸灭菌法第二节根本技术37第三十七页，共四十八页。2.无菌操作过程A清洗玻璃器皿的清洗实验材料的清洗B灭菌※培养材料的灭菌以药剂灭菌法为主主要考虑：药剂的灭菌效果、材料对药剂的耐受力38第三十八页，共四十八页。39第三十九页，共四十八页。40第四十页，共四十八页。※培养基灭菌高压蒸汽灭菌过滤灭菌C接种经过外表灭菌的材料，按不同的要求，经过剪切、整理后，移植到培养基上培养的过程。※接种室〔无菌操作室〕的灭菌※接种台的灭菌※工作人员本卷须知41第四十一页，共四十八页。3.实验室生物平安概念：指那些用以防止发生病原体或毒素无意中暴露及意外释放的保护原那么、技术及实践。传染性微生物的危险程度分4级——1级、2级、3级、4级生物平安水平〔BSL〕相应的也分为4级——BSL1〔根底实验室〕BSL2〔根底实验室〕BSL3〔防护实验室〕BSL4〔最高防护实验室〕42第四十二页，共四十八页。二、细胞制备：机械分散法淋巴细胞别离：肝素抗凝血剂+Hanks稀释→分级别离→吸取→加其它培养液单细胞悬胰蛋白酶细胞T、B细胞别离：尼龙棉柱过滤B细胞粘附液的制备酶消化法别离法T细胞过滤胶原酶CD4/CD8细胞别离：SephadaG-10柱或流式细胞分选仪螯合剂分散法单核/巨噬细胞别离淋巴细胞不粘，〔与玻面粘附〕单核/巨噬细胞粘附43第四十三页，共四十八页。三、细胞计数法：血细胞计数板或器细胞分装；四、细胞培养与传代五、细胞形态学检查法：一般形态观察●利用倒置显普通染色观察〔Giemsa染核〕微镜观察法特殊染色法：DNA〔Feulgen反...
