细胞工程主要技术2动物细胞工程主要技术动物细胞工程主要技术第一章动物细胞转化（诱变）第二章细胞融合技术第三章哺乳动物克隆技术第四章哺乳动物胚胎培养与移植利用杂交瘤制备单克隆抗体技术干细胞技术3第一章动物细胞的转化（诱变）第一章动物细胞的转化（诱变）通过细胞培养，世界上已建立了大量细胞株，我国业已通过细胞培养，世界上已建立了大量细胞株，我国业已建立了上百个细胞株，为细胞生物学和医学做出了重大贡献。建立了上百个细胞株，为细胞生物学和医学做出了重大贡献。正常组织的初级培养物，在传代培养过程中，细胞的寿正常组织的初级培养物，在传代培养过程中，细胞的寿命有一定的限度，只有命有一定的限度，只有癌细胞癌细胞和和发生转化的细胞发生转化的细胞才能无限增才能无限增殖下去。殖下去。所谓所谓转化即是即是指正常细胞在某种因子的作用下发生突变而成为具有癌特性的细胞。4建立无限细胞系的关键就是要千方百计建立无限细胞系的关键就是要千方百计地使培养细胞发生转化，地使培养细胞发生转化，即用某种因子刺激即用某种因子刺激正常细胞发生突变而具有癌特性。正常细胞发生突变而具有癌特性。目前，使正常培养细胞发生转化的目前，使正常培养细胞发生转化的刺激刺激因子因子主要有主要有三大类三大类：：物理因子、化学因子和物理因子、化学因子和生物因子。生物因子。5（一）物理因子能使培养细胞发生转化的能使培养细胞发生转化的物理因子主要是指物理因子主要是指一些电离辐射：一些电离辐射：放射性同位素的射线：放射性同位素的射线：6060CoCo、、1414CC、、131131II、、3232PP、、33HH…………X射线射线紫外线照射紫外线照射物理致癌剂6（二）化学因子对细胞具有转化作用的对细胞具有转化作用的化学因子达数千种之多，化学因子达数千种之多，其中有无机物，也有有机物。其中有无机物，也有有机物。无机物：：砷、石棉、铬化合物、镍化合物、镉化砷、石棉、铬化合物、镍化合物、镉化合物合物…………有机物：：苯、联苯胺、杂环烃、煤焦油、黄曲霉苯、联苯胺、杂环烃、煤焦油、黄曲霉素素(aflatoxin)(aflatoxin)、亚硝胺、烟碱、亚硝胺、烟碱(nicotine)(nicotine)…………化学致癌剂7（三）生物因子对细胞具有转化作用的生物因子为对细胞具有转化作用的生物因子为肿瘤病毒肿瘤病毒(tumorvirus)(tumorvirus)，又称，又称致癌病毒致癌病毒(oncogenicvirus)(oncogenicvirus)。。现已发现有许多种病毒可引起动物或植物发现已发现有许多种病毒可引起动物或植物发生肿瘤。生肿瘤。肿瘤病毒中有肿瘤病毒中有DNADNA病毒，也有病毒，也有RNARNA病病毒。毒。8Rous肉瘤病毒(Roussarcomavirus)(Roussarcomavirus)：：一种一种RNARNA病毒，其基因组含有一个病毒，其基因组含有一个癌基因癌基因srcsrc，编码，编码产物为具有产物为具有蛋白质激酶活性的蛋白质激酶活性的pp60pp60srcsrc蛋白蛋白，可使，可使许多蛋白质磷酸化，通过级联反应，诱发细胞癌许多蛋白质磷酸化，通过级联反应，诱发细胞癌变。变。pp60pp60srcsrc蛋白蛋白是一种膜蛋白，结合在质膜的内是一种膜蛋白，结合在质膜的内表面，它表面，它可催化磷酸根转移到一些蛋白质的酪氨可催化磷酸根转移到一些蛋白质的酪氨酸残基上，使磷酸化酪氨酸在细胞中的含量提高酸残基上，使磷酸化酪氨酸在细胞中的含量提高了了1010倍。倍。9(Src(Src蛋白蛋白,Tyr,Tyr激酶激酶))PPTyrTyr蛋白质磷酸化蛋白质磷酸化细胞癌变无活性无活性pp60pp60srcsrcRSV病毒中v-src基因的致癌机制图解质膜质膜跨膜受体蛋白跨膜受体蛋白细胞外配体细胞外配体活性活性ppp60p60srcsrc质膜质膜跨膜受体蛋白跨膜受体蛋白磷酸化酪氨酸两种作用：一是使细胞的正常调节机制失调,细胞增殖失去控制；二是使细胞的粘着性丧失,易发生扩散和转移。10虽然虽然动物细胞动物细胞在培养皿、培养瓶、培养板中均可生在培养皿、培养瓶、培养板中均可生长，但长，但在体外利用培养罐进行大量培养就不象培养细菌在体外利用培养罐进行大量培养就不象培养细菌和酵母那样容易，是动物细胞培养的技术难题之一。和酵母那样容易，是动物细胞...
