显微镜细胞计数法血细胞计数仪计数法直接计数法间接计数法（比值计数法）将标本作适当稀释(或浓缩)后直接在显微镜下计数一定容积内的细胞，经换算可知单位体积标本中的细胞数。一、原理二、应用常用于血细胞计数、尿沉渣定量分析、脑脊液细胞计数、浆膜腔积液细胞计数、精子计数等。1.显微镜三.器材2.微量吸管3.计数板：改良Neubauer计数板2原红早幼红中幼红晚幼红网织红网织红红细红细胞胞骨髓造血干细胞Epo红系祖细胞erythrocyteredbloodcell用等渗稀释液将血液稀释一定倍数，充入计数池中，于显微镜下计数一定体积内的红细胞数，经过换算求得每升血液中的红细胞数量。一.原理(redbloodcellcount,RBC)1.显微镜二.器材2.微量吸管3.计数板：改良Neubauer计数板氯化钠1.0g结晶硫酸钠5.0g氯化高汞0.5g蒸馏水加至200ml三.试剂赫姆氏（Hayem）红细胞稀释液氯化钠：调节渗透压硫酸钠：提高比密，防止红细胞粘连。氯化高汞：防腐剂(RBC)四.方法1.小试管加RBC稀释液1.99ml。2.采血，取血10ul。3.擦去管外的血，轻吹入试管底部，再漱洗吸管2~3次，立即混匀。4.混匀后充入计数室，静置3~5min，高倍镜下计数。(RBC)充液位置充液位置为红细胞计数区域压线细胞的计数原则：数左不数右，数上不数下五.计算RBC/L＝5个中方格内RBC数/5×25×10×200×106＝5个中方格内RBC数/100×1012六.报告方式×1012／LRBC：(RBC)七.参考值男性：(4.0～5.5)×1012／L女性：(3.5～5.0)×1012／L新生儿：(6.0～7.0)×1012／L400～550万/ul350～500万/ul(RBC)八.注意事项1.采血时不要过分挤压。2.取血量必须准确，动作要迅速，防止血液凝固。3.血液加入稀释液后，应立即混匀。4.充池前要摇匀，充池时不能产生气泡。5.压线细胞应数上不数下，数左不数右。(RBC)亚铁血红素亚铁血红素珠蛋白亚铁血红素亚铁血红素（原卟啉、Fe2+）（原卟啉、Fe2+）（原卟啉、Fe2+）（原卟啉、Fe2+）（Hemoglobin，Hb或HGB）亚铁血红素结构示意图HbA：α2β2成人占90%以上HbA2：α2δ2成人约占2～3%HbF(胎儿Hb)：α2γ2成人2%以下HbO2(氧合血红蛋白)Hbred(还原血红蛋白)HbCO(碳氧血红蛋白)Hi(高铁血红蛋白)SHb(硫化血红蛋白)主要成分少量与氧结合空着与CO结合Fe2＋→Fe3＋与S结合氰化高铁血红蛋白测定法（HiCN法）碱羟高铁血红素法（AHD575法）十二烷基硫酸钠血红蛋白法(SDS-Hb法)沙利(Sahli)法(县及县以上医院已淘汰)一.原理Hb＋CN－氧化HiCN为棕红色，最大吸收峰540nm。根据标本的吸光度可知Hb浓度。HiCNHi(HiCN法)注：硫化血红蛋白(SHb)不能被转化氰化钾0.05g高铁氰化钾0.2g磷酸二氢钾0.14g非离子表面活性剂1.0ml蒸馏水加至1000ml二.试剂HiCN转化液(文齐液)调pH7.0～7.4，置棕色玻璃瓶中密封保存。氧化调节pH促溶,防混浊(HiCN法)提供CN-三.方法4.实际工作中，可用HiCN参考液，按生化方法绘制标准曲线，或求出K值后计算。K＝∑Hb（g）/∑A1.5.0mlHb转化液＋血20ul,混匀,静置5min。2.分光光度计比色，波长540nm，以空白转化液调零，测定吸光度“A”。3.如用符合WHO标准的光度计，则可据“A”直接计算Hb浓度。Hb(g/L)＝A540/44000×64458×251＝A×367.7氰化高铁血红蛋白标准曲线00.10.20.30.40.50.60.050.0100.0150.0200.0250.0Hb(g/L)A540Hb(g/L)A500.1281000.2651500.3852000.523K=∑Hb/∑A=500/1.301=384.32Hb=KA1.KCN为剧毒药品，防污染。2.Hb转化液不能存于塑料瓶中。否则CN-下降，结果偏低。3.分光光度计应校正后使用。4.标准曲线或K值应定期校正。四.注意事项HiCN法SDS-Hb法优点：操作简单；结果稳定。缺点：氰化钾有剧毒；高白细胞或高球蛋白血症可致浑浊；HbCO转化较慢。推荐方法优点：操作简单；结果稳定；无公害。缺点：摩尔消光系数未确定；SDS本身质量差异较大；破坏白细胞。次选方法如何采用SDS-Hb法进行血红蛋白测定？1.HiCN法标准曲线绘制2.SDS-Hb法标准工作曲线绘制1)取4份不同浓度抗凝血或溶血液用HiCN法测定吸光度，并求出其Hb浓度。2)再用SDS-Hb法测定4份标本的吸光度。3)以4份标本Hb浓度为横坐标，SDS-Hb法测得的吸光度为纵坐标，绘制标准工作曲线。3.SDS-Hb法测定待测标本成男：120～160g/L成女：110～150g/L新生...
