专题三植物的组织培养技术课题2月季的花药培养秋水仙素处理花药离体培养单倍体育种AABB×aabbPAaBbF1AAbbABAbaBab单倍体植株AABBAAbbaaBBaabb原理：细胞的全能性植株矮小，高度不育月季(RosachinensisJacq.)玫瑰(RosarugosaThunb.)一年多生，花朵较大，花茎光滑、茎上刺少而粗，香味寡淡，果实圆形。一年一生，花朵较小，花茎有刚毛、茎上刺多而小，香味浓郁，果实扁圆形。被子植物：种子有果皮和种皮包被的植物。被子植物和裸子植物裸子植物：种子没有果皮，但有种皮包被的植物。实例：向日葵、梨、月季等开花并结果的植物。实例：松、杉、柏等。花的结构花丝：输送营养花药：囊状结构，内有很多花粉(细胞）2、花粉母细胞(小孢子母细胞)花粉(未成熟)即：单倍体的生殖细胞3、发育阶段：四分体时期、单核期、双核期（一）被子植物的花粉发育1、雄蕊基础知识减数分裂花粉管细胞核生殖细胞核花粉发育过程图小孢子母细胞花粉母细胞4个小孢子减数分裂小孢子四分体时期单核居中期单核靠边期双核期有丝分裂2个精子有丝分裂营养细胞单核期生殖细胞雌蕊的结构（二）产生花粉植株(单倍体植株)的两种途径花粉花粉胚状体愈伤组织丛芽生根移栽脱分化分化再分化诱导脱分化说明：两种途径之间并没有绝对的界限，主要取决于培养基中激素的种类及其浓度的配比。基础知识花粉花粉胚状体愈伤组织丛芽生根移栽脱分化分化再分化诱导脱分化基础知识胚状体(体细胞胚或花粉胚）组织培养过程中，某些离体的体细胞或花粉细胞转变成的与胚非常相似的结构。(也具有胚芽、胚根、胚轴等结构）胚状体的发育过程和正常胚类似。（二）产生花粉植株(单倍体植株)的两种途径（三）影响花药培养的因素1、材料的选择此外，亲本生长条件、材料低温预处理、接种密度等2、培养基的组成从花药所处时期看：从花粉发育时期看：从花蕾开放程度看：初花期(花期早期)的花药单核期(单核靠边期)的花粉完全未开放的花蕾为什么花瓣松动会给材料的消毒带来困难？为什么选择完全未开放的花蕾作花药离体培养的材料？花瓣松动，微生物可能侵入到花药，给消毒带来困难。2、含菌少、易消毒1、可挑选到单核期的花药实验操作1、材料的选取2、材料的消毒3、接种和培养4、鉴定和筛选1、材料选取通过镜检确定花粉是否处于适宜的发育期：最常用的方法：醋酸洋红法(将细胞核染成红色）某些植物的花粉细胞核不易着色：焙花青-铬矾法，将花粉细胞核染成蓝黑色。从花药的时期看：从花粉发育期看：从花蕾开程度看：选择适宜的月季花药初花期的花药单核期的花粉完全未开放的花蕾2、材料的消毒花蕾（70％酒精）约30s（无菌水）清洗（无菌吸水纸）吸干水分（0.1％氯化汞溶液）（无菌水）冲洗提示：用于培养花药的花蕾，外面有花萼、花瓣保护，通常处于无菌状态，所以只需将整个花蕾消毒即可。思考：月季花蕾的消毒与菊花外植体的消毒相比，二者有何不同？在酒精消毒前，花药不需要预先用流水冲洗、洗衣粉洗涤和软刷刷洗。在无菌条件下除去花蕾的萼片和花瓣，取出花药b、要彻底去除花丝取出花药后立即接种于培养基上，每瓶接种花药7-10个。①剥取花药a、尽量不损伤花药②接种注意：3、接种和培养温度控制在25℃左右，不需要光照。幼小植株形成后才需要光照。③培养培养20-30天后，花药分裂形成愈伤组织或胚状体若形成胚状体：一个花药会产生大量幼小植株，必须尽快将幼小植株分开，分别移植到新的培养基上。若形成愈伤组织：应及时将愈伤组织转移到分化培养基上，以便进一步分化出再生植株在花药培养中，特别是通过愈伤组织形成的花粉植株，染色体组的数目常常会发生改变。（主要原因是营养核和生殖核融合造成的）4、鉴定和筛选菊花组织培养与月季花药离体培养的比较比较项目菊花组织培养月季花药离体培养原理植物激素染色体倍性的鉴定材料培养结果细胞的全能性体细胞花药(花粉）正常植株单倍体植株不必添加需要添加不需要需要Thanks!
