第4章 电泳技术VIP免费

医用检验技术及应用电泳技术电泳技术医用检验技术及应用电泳技术目录•第一节区带电泳•第二节等电聚焦电泳•第三节SDS-PAGE电泳•第四节二维电泳•第五节印迹技术•第六节免疫电泳•第七节高效毛细管电泳技术•第八节电泳分析仪医用检验技术及应用电泳技术基本原理不同性质的质点，由于带电性质及电量不同，在一定电场强度下移动的方向和速度亦不同。蛋白质分子为两性电解质等电点pH>等电点带负电pH<等电点带正电医用检验技术及应用电泳技术质点所带净电荷量越多（介质的pH值离等电点越远）质点的直径越小越接近球形则它在电场中的泳动速度越快，迁移率亦越大。基本原理医用检验技术及应用电泳技术区带电泳•检验医学中的应用－－血清蛋白电泳图6-1正常血清蛋白电泳图谱上图：箭头示电泳方向，右侧示各条带的主要组分；下图：光密度扫描后电泳图谱；HP：触珠蛋白；CP：铜蓝蛋白Alb：清蛋白α1：α1酸性糖蛋白、α1抗胰蛋白酶α2：HP、CP、α2巨球蛋白、α脂蛋白β：运铁蛋白、补体系统、β脂蛋白γ：IgG、IgM、IgA、IgD、IgE医用检验技术及应用电泳技术区带电泳图6-2几种常见异常血清蛋白图谱A：双清蛋白血清电泳图；B：慢性肝病或肝硬变常见的-融合的桥连现象；C：免疫球蛋白寡克隆增生型；D：M蛋白血清型（IgA型）；N：正常对照血清；P：患者血清ABCD医用检验技术及应用电泳技术区带电泳•检验医学中的应用－－同工酶电泳图6-3LDH同工酶区带电泳图谱左：5份血清iso-LDH电泳图；右：iso-LDH电泳示意图医用检验技术及应用电泳技术第一节区带电泳•检验医学中的应用－－同工酶电泳图6-4CK同工酶示意图左：血清iso-CK电泳图，3示正常血清（CKMB<5%），1、2、4示急性心梗（CKMB>5%）；4示CKBB阳性；右：iso-CK电泳图谱示意图医用检验技术及应用电泳技术区带电泳•实验原理让pH>pI（max）所有蛋白质带负电各种蛋白质带电量不同电泳速度不同经过一段时间电泳后，各种蛋白质被区分开医用检验技术及应用电泳技术区带电泳图6-1正常血清蛋白电泳图谱上图：箭头示电泳方向，右侧示各条带的主要组分；下图：光密度扫描后电泳图谱；HP：触珠蛋白；CP：铜蓝蛋白Alb：清蛋白α1：α1酸性糖蛋白、α1抗胰蛋白酶α2：HP、CP、α2巨球蛋白、α脂蛋白β：运铁蛋白、补体系统、β脂蛋白γ：IgG、IgM、IgA、IgD、IgE医用检验技术及应用电泳技术医用检验技术及应用电泳技术医用检验技术及应用电泳技术第二节等电聚焦电泳•检验医学中的应用－－次级同工酶的分离图6-5碱性磷酸酶同工酶等电聚焦电泳图谱左：iso-ALP等电聚焦示意图；右：胆道梗阻性疾病iso-ALP电泳图谱医用检验技术及应用电泳技术第二节等电聚焦电泳•区带电泳的原理是不同的蛋白质有不同的电泳速度•那么可不可以有另外一种方法：使得不同蛋白质在泳道中本来就有“固定”位置，蛋白质在相应的位置上停留？•蛋白质如何能够停止电泳？•除了切断电源之外？•蛋白质不带电了——蛋白质处于等电点溶液中医用检验技术及应用电泳技术第二节等电聚焦电泳•基本原理在等电聚焦电泳时必须有一个稳定的pH梯度介质，使pH值从正极向负极渐次增加，形成一线性pH梯度。蛋白质混合物加入有pH梯度的电泳管中，在电场中经一定时间后，混合物中各组分将分别聚焦在与各等电点相应的pH介质区域，形成分离的各种蛋白质区带。这就是等电聚焦电泳分离蛋白质的基本原理。医用检验技术及应用电泳技术第三节SDS-PAGE电泳•等电聚焦根据等电点将蛋白质分离•那还能不能根据其他性质将蛋白质分离?•区带电泳的电泳速度的影响条件较多（大小、电荷、形状），不是根据单一性质分离•有一种方法能根据蛋白质的分子量使之带上相应的电荷，远远大于蛋白质本身电荷的大小，并使电荷成为电泳速度的主要决定因素，那么电泳速度只和分子量相关医用检验技术及应用电泳技术第三节SDS-PAGE电泳SDS是一种阴离子表面活性剂，能使蛋白质负载了大量负电荷，大大超过了天然蛋白质的原有电荷，因此蛋白质之间原有电荷的差异就无显著效应，蛋白质带电量的多少，只与蛋白质大小即分子量有关，此时，不同泳动速率仅反映了各蛋白质亚基的分子量的差别。医用检验技术及应用电泳技术第三节...