流式细胞术在科研中流式细胞术在科研中的应用的应用什么是流式细胞仪●流式细胞仪实物BDFACSVantageBD-Calibur流式细胞仪可检测到的细胞参数非荧光信号非荧光信号颗粒度细胞大小=前向角散射光（FSC）细胞相对大小及其表面积=侧向角散射光（SSC）细胞颗粒度及细胞内细胞器的相对复杂性外周全血细胞散射光双参数点图荧光信号荧光信号荧光强度（荧光强度（FLFL）：细胞上的荧光染料被激光激发后发射出）：细胞上的荧光染料被激光激发后发射出的荧光，不同的荧光染料其发射波长不同。的荧光，不同的荧光染料其发射波长不同。有荧光标记的细胞与无荧光标记的区分开来（阴阳）有荧光标记的细胞与无荧光标记的区分开来（阴阳）高高FLFL细胞与低细胞与低FLFL细胞区分开来（强弱）细胞区分开来（强弱）一般的流式细胞仪只装有一个激光光源（一般的流式细胞仪只装有一个激光光源（488nm488nm），可测出），可测出三个三个FLFL，即，即FL1FL1、、FL2FL2、、FL3FL3，大型的流式细胞仪装有，大型的流式细胞仪装有两个或三个激光光源（两个或三个激光光源（488nm488nm、、633nm633nm和和325nm325nm），可测），可测出出66个个FLFL。。荧光信号双色直接染色流式报告的图一般分为四种，即散点图、直方图、密度图和二维等高图等。最常用的为散点图和直方图。几个概念：%Gated：阳性细胞百分比。反映细胞群体中阳性细胞的数量。Mean：平均荧光强度，与被检测物质的表达量有关，在正态分布时一般用该值。GeoMean：几何平均荧光强度，在阳性细胞为偏态分布时一般用该值。散点图密度图二维等高图直方图图报告中常见的几种流式细胞图R1File:4AcquisitionDate:06-Mar-03QuadEvents%GatedXMeanYMeanUL2542.4037.47461.36UR106710.08816.86468.89LL529149.9819.574.41LR397537.55418.809.87图AnnexinV/PI双标记分析细胞凋亡和坏死流式细胞仪数据分析点图分析流式细胞仪数据分析直方图分析图中100～101（M1）为阴性细胞，101以上的（M2）为阳性细胞当前流式细胞分析发展趋势从相对细胞计数到绝对细胞计数从相对细胞计数到绝对细胞计数从相对定量到绝对定量分析从相对定量到绝对定量分析从单色到多色荧光分析从单色到多色荧光分析从细胞膜成分到细胞内成分分析从细胞膜成分到细胞内成分分析从细胞分析到可溶性成分的流式细胞分从细胞分析到可溶性成分的流式细胞分析析今天主要内容：流式细胞术在细胞凋亡检测中的应用流式细胞术在细胞凋亡检测中的应用流式细胞术在肿瘤细胞流式细胞术在肿瘤细胞DNADNA倍体中的应倍体中的应用用流式细胞仪的分选功能流式细胞仪的分选功能流式细胞术在蛋白检测中的应用流式细胞术在蛋白检测中的应用细胞凋亡检测细胞凋亡检测11、半胱氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶33检测法（早早期）检测法（早早期）22、、AnnexinV-FITC/PIAnnexinV-FITC/PI法（早期）法（早期）33、、Apo2.7Apo2.7检测法（早期）检测法（早期）44、、TUNELTUNEL法（晚期）法（晚期）55、、DNADNA含量分析法（晚晚期）含量分析法（晚晚期）66、细胞凋亡相关蛋白的流式细胞术检测、细胞凋亡相关蛋白的流式细胞术检测流式细胞术检测细胞凋亡细胞凋亡的分析细胞凋亡的主要表现细胞凋亡的主要表现细胞内水解酶改变：如细胞内水解酶改变：如Caspase-3Caspase-3活化活化细胞膜不对称性改变，磷脂酰丝氨酸外翻，细胞膜不对称性改变，磷脂酰丝氨酸外翻，但仍然保持膜的完整性：但仍然保持膜的完整性：AnnexinV/PIAnnexinV/PI细胞核细胞核DNADNA的断裂改变：的断裂改变：TUNNELTUNNEL实验实验（（APO-BRDUAPO-BRDU，，APO-DIRECTAPO-DIRECT））凋亡相关蛋白：凋亡相关蛋白：FasFasBcl-2Bcl-2细胞凋亡——ActiveCaspases-3细胞凋亡——Caspases-3细胞凋亡——AnnexinⅤ凋亡检测（AnnexinV/PI法）PIAnnexinV-FITCDNADNA倍体的流式分析倍体的流式分析细胞细胞DNADNA含量检测含量检测细胞固定后用细胞固定后用PIPI（Propidiumiodide碘化丙啶），染色，因为染色，因为PIPI特异性结合于细胞特异性结合于细胞DNADNA，，荧光强度与荧光强度与PIPI的结合量呈良好的线性关...
