郑秋月郑秋月辽宁出入境检验检疫局辽宁出入境检验检疫局进出口食品中肠杆菌科检验方法进出口食品中肠杆菌科检验方法--Petrifilm™Petrifilm™测试片法测试片法什么是肠杆菌科?什么是肠杆菌科?•据细菌学新的分类,肠杆菌科现己包括肠道病据细菌学新的分类,肠杆菌科现己包括肠道病原性和非病原性的艾希氏、志贺氏、爱德华氏、原性和非病原性的艾希氏、志贺氏、爱德华氏、沙门氏、亚利桑那、枸橼酸杆菌、克雷伯氏、沙门氏、亚利桑那、枸橼酸杆菌、克雷伯氏、肠杆菌、团聚肠杆菌、哈夫尼亚、沙雷氏、变肠杆菌、团聚肠杆菌、哈夫尼亚、沙雷氏、变形杆菌、耶尔森氏、欧文形杆菌、耶尔森氏、欧文1414个菌属及其他个菌属及其他99个菌群的细菌。故以其作为指标菌则较大肠菌个菌群的细菌。故以其作为指标菌则较大肠菌群等指标菌更敏感,更准确。群等指标菌更敏感,更准确。•革兰氏阴性革兰氏阴性•无芽孢杆菌无芽孢杆菌•氧化酶阴性氧化酶阴性•发酵葡萄糖产酸或产酸产气发酵葡萄糖产酸或产酸产气•习惯生长于肠道、土壤、水和蔬菜习惯生长于肠道、土壤、水和蔬菜•在干燥环境中存活性差在干燥环境中存活性差•对热敏感对热敏感•部分对人体有致病性部分对人体有致病性好氧或兼性厌氧发酵型G-杆菌氧化酶阴性氧化酶阳性肠杆菌科乳糖发酵非乳糖发酵埃希氏菌克雷伯氏菌柠檬酸杆菌等沙门氏菌志贺氏杆菌耶尔森氏菌,普罗威登斯菌等•从四种食品中共分离出肠杆菌科中九个菌属的十五从四种食品中共分离出肠杆菌科中九个菌属的十五种细菌。除脱脂淡奶粉外,从其它三种食品中均分种细菌。除脱脂淡奶粉外,从其它三种食品中均分离出了阴沟肠杆菌;在速冻方便食品中,克雷伯氏离出了阴沟肠杆菌;在速冻方便食品中,克雷伯氏菌为优势菌;在脱水白罗卜和脱脂淡奶粉中均检出菌为优势菌;在脱水白罗卜和脱脂淡奶粉中均检出了团聚肠杆菌;而在冻鱼片中,检出的肠杆菌科属了团聚肠杆菌;而在冻鱼片中,检出的肠杆菌科属比较多,表明其污染源较为复杂。特别值得注意的比较多,表明其污染源较为复杂。特别值得注意的是在冻鱼片中还检出沙雷氏菌;在冻菜卷中还检出是在冻鱼片中还检出沙雷氏菌;在冻菜卷中还检出了志贺氏菌。目前,在我国仍广泛采用大肠菌群作了志贺氏菌。目前,在我国仍广泛采用大肠菌群作为指标菌,很少以肠杆菌科作为食品卫生指标菌,为指标菌,很少以肠杆菌科作为食品卫生指标菌,但对欧洲出口食品时有肠杆菌科检测计数要求。但对欧洲出口食品时有肠杆菌科检测计数要求。标准意义标准意义•肠杆菌科作为食品卫生指标菌在欧洲已有多年历史,肠杆菌科作为食品卫生指标菌在欧洲已有多年历史,对其检验方法不少学者曾进行了研究。目前北欧食对其检验方法不少学者曾进行了研究。目前北欧食品分析委员会(品分析委员会(NMKLNMKL)及)及ISOISO已制定了食品中已制定了食品中肠杆菌科检验的标准方法。包括了直接增菌和前增肠杆菌科检验的标准方法。包括了直接增菌和前增菌的定性方法;菌落计数和带恢复的菌的定性方法;菌落计数和带恢复的MPNMPN定量方定量方法。近年来,随着对外贸易的发展法。近年来,随着对外贸易的发展,,欧洲一些国家欧洲一些国家己对我国出口的某些食品和动物饲料提出了检测和己对我国出口的某些食品和动物饲料提出了检测和限量要求。且将其作为国际间食品微生物学实验室限量要求。且将其作为国际间食品微生物学实验室质量控制、水平测试的必测项目之一。质量控制、水平测试的必测项目之一。速食食品的微生物指标肠杆菌科的传统检测法肠杆菌科的传统检测法•平板计数法平板计数法VioletRedBileVioletRedBile葡萄糖琼脂葡萄糖琼脂(VRBG)(VRBG)或或VioletRedBileVioletRedBile乳糖琼脂+乳糖琼脂+11%葡萄糖%葡萄糖(VRB(VRBL+G)L+G)363611C,C,培养培养24h,24h,计数红色菌落计数红色菌落((直径直径0.50.5m)m)•MPNMPN法法煌绿葡萄糖肉汤煌绿葡萄糖肉汤(BGGB)(BGGB)99管管BGGBBGGB发酵,发酵,VRBGVRBG琼脂分离,生化鉴定琼脂分离,生化鉴定•进出口食品中肠杆菌科检验方法-进出口食品中肠杆菌科检验方法-Petrifilm™Petrifilm™测试片法测试片法标准文本...