探针:是分子杂交的必需工具,它是带有某种标记的一段碱基序列互补于待测基因序列的DNA或RNA或寡聚核苷酸2
克隆的无性繁殖:(DNACloning)基因的无性繁殖,克隆是从一群细胞中分离单一细胞,然后让其复制自己,产生许多完全相同的细胞
DNA克隆过程就是基因无性繁殖的过程,是黑牛技术
包括:制备基因选择载体基因与克隆载体重组重组DNA转化宿主细胞培养含有重组DNA的宿主细胞
PCR的概念及基本原理:聚合酶链反应,是一种体外扩增技术
以拟扩增的DNA分子为模板,以一对分别与模板5'端和3'端相互补的寡核苷酸分子为引物,在DNA-pol的作用下,按照半保留复制的机制沿着模板链延伸至完成新的DNA合成,重复这一过程,即可使目的DNA得以扩增
PCR是一种体外特异性快速扩增DNA的技术
PCR的特异性取决于一对人工合成的寡核苷酸,称引物
这一对寡核苷酸分别互补于待扩增DNA模版3‘端序列
待扩增DNA模版加热(94℃)变性和退火后,一对引物分别与两条单链模版的3’端序列特异性复性(60℃),在TaqDNA聚合酶催化下(72℃),从引物的5‘端向3’端延伸合成新的DNA链
从1个DNA分子产生2个DNA分子
这种变性----复性----延伸的过程称一个PCR循环
30-40次循环,DNA模版扩增数百万倍
基因工程:基因工程是指某种生物细胞的基因或人工合成的基因经重组后,引入另一种生物细胞,在此种细胞内大量合成该基因编码的蛋白质(或多肽),改变此种细胞的基因表型
基因工程是将目的基因与载体重组,通过转化宿主细胞,重组DNA在宿主细胞内自主复制和表达目的基因,表达产物分离纯化后形成基因工程产品
基因工程的基本过程:一、目的基因的制备二、载体DNA的选择三、目的基因和载体连接四、重组DNA分子转化宿主细胞五、克隆的分离和鉴定六、基因表达7