脊髓伤后脊髓组织一氧化氮合酶活性的动态变化及其意义1材料与方法1.1实验动物与分组健康、封闭群sd大鼠42只,体质量(280X177;30)g,随机分为假手术组及根据后路压迫伤后取材的时间分为0、5、10、20、30和60min组,每组6只。1.2试剂及器材l-[2,3,4,5-3h]-arginine、dowexag50w-x8、nadph、钙调蛋白均购自sigma公司,其余试剂为国产ar级。megafuge1.0r低温离心机为日本产品,beckmanls5000ce液体闪烁仪为美国产品,cps-1a超声波粉碎机为上海超声波仪器厂产品。1.3方法1.3.1动物模型的制备动物用1%戊巴比妥钠30mg/kg腹腔注射医学专用,取后正中切口,切除t8~10椎板,暴露脊髓,按nystrom方法[2]后路压迫脊髓(35.0g/10min)。假手术组仅行脊髓暴露而不致伤。1.3.2脊髓标本的采集按分组时间要求处死动物后,立即浸入冰水中,取伤段脊髓或相应部位脊髓置于冰冷的hepes缓冲液中(20mmol/l,ph7.4),匀浆,超声粉碎。立即置于4℃低温离心机中离心(15000r/minX215;30min)。1.3.3[3h]citrulline检测将上述25ml上清液加于含有2mmol/lnadph、0.5mmol/lcacl2、10g/l钙调蛋白的50mmol/lhepes缓冲液中,ph为7.4。然后加入25ml[3h]l-arginine(25mci/25ml),置于24℃恒温水浴箱中30min。立即加入含有2mmol/ledta的20mmol/lhepes反应停止液中,过dowexag层析柱,于beckman液闪仪中测定[3h]-citrulline的放射活性。1.3.4蛋白含量的测定采用改良lowry法[3]测定蛋白含量。1.3.5nos活性表示nos活性表示为每分钟每毫克蛋白形成的[3h]-citrulline的量。创伤后各时相nos活性以与假手术组第1页共2页相比而得的相对值表示。1.3.6统计学处理采用f检验和t检验进行统计学处理。2结果脊髓压迫伤后即刻,伤段脊髓组织nos活性升高到正常脊髓的1.42倍,有显著差异(p第2页共2页