补阳还五汤及有效部位生物碱和苷对大鼠血小板聚集及血小板环核苷酸的影响VIP免费

http://www.paper.edu.cn-1-补阳还五汤及有效部位生物碱和苷对大鼠血小板聚集及血小板环核苷酸的影响1江劲波1，杨静2，邓常青*31.湖南中医药大学第一附属医院，湖南长沙（410007）；2.中国中医科学院西苑医院，北京（100091）；3.湖南中医药大学病理生理实验室，长沙（410007）摘要：目的：探讨补阳还五汤及其有效部位生物碱和苷抗血小板聚集及机制。方法：大鼠分别给予补阳还五汤原方、生物碱、苷和抵克利得，进行ADP诱导的血小板聚集实验。取聚集试验前、后的血小板提取cAMP、cGMP，采用放免法检测cAMP、cGMP。结果：各组血小板聚集比较，生物碱组、苷组和抵克利得组血小板聚集强度与空白组相比显著降低(P<0.01)。原方组血小板聚集强度与空白组相比显著降低(P<0.05)。血小板聚集后cAMP含量降低（P＜0.01)，而原方、生物碱、苷和抵克利得均可抑制ADP诱导的血小板cAMP下降（P＜0.05～P＜0.01）。血小板聚集后cGMP含量降低（P＜0.01），原方、生物碱、苷和抵克利得也可抑制聚集后血小板cGMP下降（P＜0.05～P＜0.01）结论：生物碱、苷、原方和抵克利得可抑制ADP诱导的大鼠血小板聚集,各药可抑制血小板聚集后血小板内cAMP、cGMP的下降，提示其抗血小板聚集作用是通过抑制聚集后血小板内环核苷酸降低而实现的。关键词：补阳还五汤有效部位血小板聚集环磷酸腺苷环磷酸鸟苷动脉血栓形成是心脑血管缺血性疾病的主要原因之一。在动脉血栓形成过程中，血小板活化是其主要原因之一，其中血小板聚集是血小板活化过程中不可缺少的环节。血小板内环磷酸腺苷（cAMP）、环磷酸尿苷（cGMP）是细胞内信号传递的第二信使，各种诱导剂作用于血小板时首先与其特异的受体作用，通过共同途径第二信使，从而促使血小板聚集，引起血小板活化[1]。目前研究表明，升高cAMP、cGMP的药物能抑制诱聚剂诱导的血小板聚集[2，3]。补阳还五汤是治疗缺血性脑血管病的方剂，已有的研究表明，该方具有抗动脉血栓的作用。在对血小板活化的研究中发现，补阳还五汤对生理状态下大鼠血液中血小板活化因子(PAF)无明显影响，但对血栓形成大鼠动脉血中PAF含量的升高具有明显抑制作用[4]。大鼠口服给药后，对电刺激动脉血栓模型和静脉血栓模型均有抑制作用[5，6]。新近我们研究表明，该方中抗缺血性脑损伤的主要有效部位为生物碱、多糖、苷、苷元[7]，由于生物碱和苷为其中主要的水溶性有效部位，因而推测该方中此两类有效部位也可能为其中抗血栓作用的物质基础之一。因此，本研究从对血小板聚集及血小板cAMP、cGMP的影响研究了该方及有效部位的抗血小板作用及机制。1材料1.1药物和试剂补阳还五汤原方由黄芪60g、赤芍9g、川芎6g、当归9g、地龙9g、桃仁9g、红花9g1[基金项目]教育部科学技术研究重点项目（No.204100）;湖南省教育厅重点项目（No.03A033）；国家自然科学基金项目（No.30572301）*通讯作者：邓常青，Tel：0731－5381123，E-mail:dchangq@sohu.com；地址：长沙市韶山中路113号邮编410007。http://www.paper.edu.cn-2-组成。上述药物由本院药剂科一次性购齐，按该方组成比例制备补阳还五汤原方提取液，生药浓度1g/ml。再由原方提取液采用酸碱沉淀、离子交换树脂层析等方法提取生物碱、苷，浓度为生物碱0.18g/ml，苷0.34g/ml。两类有效部位分离完全，相互之间无混杂，以高压液相色谱法测定有效部位中质控物的含量，对两类有效部位进行质量控制，其中生物碱中川芎嗪含量为9.76mg/g生物碱；苷中黄芪甲苷含量为2.39mg/g苷，苦杏仁苷含量为17.9mg/g苷。临用前分别配制浓度为原方750g/L,生物碱20.9g/L,苷163g/L。抵克利得（Ticlopidine）为杭州赛诺菲圣德拉堡民生制药有限公司产品，0.25g/片，批号：059，临用时以蒸馏水配成3g/L。3.8％枸橼酸钠、10％水合氯醛、10％三氯醋酸溶液、水饱和乙醚、全血血小板聚集专用稀释缓冲液为国产分析纯自配；二磷酸腺苷(ADP),由苏州大学江苏省血液学研究所提供，浓度为50µmol/L。cAMP、cGMP放射免疫分析试剂盒由上海中医药大学核医学中心提供。1.2动物SD大鼠，雌雄各半，体重(210.0±20.0)g，由湖南省卫生防疫站实验动物中心提供。2．实验方法2.1实验分组及给药方法大鼠按性别、体重分层...