DNS法测定α-淀粉酶活力的方法VIP免费

利用利用DNSDNS法测定法测定α-α-淀粉酶活淀粉酶活力的方法力的方法目的要求目的要求了解生物学研究中针对糖含量测定的常用了解生物学研究中针对糖含量测定的常用方法及相关原理。方法及相关原理。掌握一般标准曲线制作的意义及要求。掌握一般标准曲线制作的意义及要求。掌握掌握DNSDNS比色法测定比色法测定α-α-淀粉酶活力的原淀粉酶活力的原理、方法及操作步骤。理、方法及操作步骤。掌握利用掌握利用EXCELEXCEL分析工具库数据分析分析工具库数据分析————回归分析，得到回归方程及相关分析回归分析，得到回归方程及相关分析结果。结果。糖的测定方法糖的测定方法大致可分为三类：大致可分为三类：1.1.物理法物理法————旋光法、折光法、比重法；旋光法、折光法、比重法；2.2.物理化学法物理化学法————点位法、极普法、光度点位法、极普法、光度法、色谱法；法、色谱法；3.3.化学方法化学方法————斐林氏法、高锰酸钾法、斐林氏法、高锰酸钾法、碘量法、铁氰化钾法、碘量法、铁氰化钾法、DNSDNS比色法、蒽酮比色法、蒽酮比色法、咔唑比色法比色法、咔唑比色法生物学研究中关于糖测定中常用生物学研究中关于糖测定中常用的方法的方法菲林试剂滴定菲林试剂滴定————还原糖，常量分析还原糖，常量分析DNSDNS比色法比色法————还原糖，微量分析还原糖，微量分析蒽酮比色法蒽酮比色法————总糖，微量分析总糖，微量分析配制系列浓度稀释液的方法配制系列浓度稀释液的方法线性稀释线性稀释————稀释液的浓度梯度是相同的（稀释液的浓度梯度是相同的（00，，0.20.2，，0.40.4，，0.60.6，，0.80.8，，1.01.0…………）；）；对数稀释（倍数稀释）对数稀释（倍数稀释）————系列溶液的浓度比系列溶液的浓度比是一常数，取决于稀释梯度是一常数，取决于稀释梯度————22倍稀释（倍稀释（11、、1/21/2、、1/41/4、、1/81/8…………）；）；1010倍稀释（倍稀释（11、、1/101/10、、1/1001/100、、1/10001/1000…………）；）；调和浓度稀释调和浓度稀释————系列溶液的浓度为连续排列系列溶液的浓度为连续排列整数的倒数整数的倒数（（11，，1/21/2，，1/31/3，，1/41/4，，1/51/5…………）。）。α-α-淀粉酶酶活力测定的原理淀粉酶酶活力测定的原理底物（反应物）为淀粉底物（反应物）为淀粉————碘比色法（反碘比色法（反应一定量淀粉为糊精的时间）应一定量淀粉为糊精的时间）产物为麦芽糖、糊精等产物为麦芽糖、糊精等————麦芽糖为还原麦芽糖为还原糖，可以用测定还原糖的方法来测定其生糖，可以用测定还原糖的方法来测定其生成量（如成量（如DNSDNS法），从而计算出酶活力单法），从而计算出酶活力单位。位。DNSDNS试剂测定还原糖的原理试剂测定还原糖的原理淀粉酶催化产生的还原糖（麦芽糖等）能使淀粉酶催化产生的还原糖（麦芽糖等）能使3,5-3,5-二硝基水杨酸还原，生成棕红色的二硝基水杨酸还原，生成棕红色的3-3-氨基氨基-5--5-硝硝基水杨酸，其反应如下：基水杨酸，其反应如下：淀粉酶活力的大小与产生的还原糖的量成正比。淀粉酶活力的大小与产生的还原糖的量成正比。用标准浓度的麦芽糖溶液制作标准曲线，用比色用标准浓度的麦芽糖溶液制作标准曲线，用比色法测定淀粉酶作用于淀粉后生成的还原糖的量，法测定淀粉酶作用于淀粉后生成的还原糖的量，以单位样品（重量或体积）在一定时间内生成的以单位样品（重量或体积）在一定时间内生成的麦芽糖的量表示酶活力。麦芽糖的量表示酶活力。酶活力测定（酶活力测定（DNSDNS比色法）比色法）酶活力定义：在一定反应条件下（本实验为酶活力定义：在一定反应条件下（本实验为4040℃℃，，pH5.6pH5.6或或6.06.0），），11分钟反应生成分钟反应生成1mg1mg麦芽糖的酶量定义为麦芽糖的酶量定义为11个酶活力单位。个酶活力单位。注意：注意：去除去除β-β-淀粉酶的干扰（淀粉酶的干扰（β-β-淀粉酶不热淀粉酶不热耐，在耐，在70℃15min70℃15min钝化）钝化）————植物材料来源植物材料来源需要注意。本此实验中忽略不计。需要注意。本此实验中忽略不计。检测的原理：检测的原理：酶解的产物...