trizol法与常规法提取蛋白的比较VIP免费

中国耳鼻咽喉头颈外科／2008年4月，第15卷，第4期Trizol法提取大鼠耳蜗髓磷脂P0蛋白质汤黎1，郑明秀1，雷雳2，齐若梅3(1昆明医学院第二附属医院耳鼻咽喉科，云南咽喉头颈科学教育部重点实验室(首都医科大学)昆明650101；2首都医科大学附属北京同仁医院耳鼻咽喉头颈外科，耳鼻北京100730；3卫生部北京老年病研究所，北京100730)【摘要】目的用Trizol法提取大鼠耳蜗髓磷BliPO蛋白质(myelinproteinP0，P0蛋白)，与传统的蛋白裂解液裂解法比较蛋白提取效果，分析Trizol法的优势。方法Trizol法和传统的蛋白裂解液裂解法分别提取200gN250gWistar大鼠(雌雄不限)耳蜗P0蛋白，用WesternBlot法及考马斯亮兰(Bradford)法比较两种方法提取P0蛋白含量及效果。结果Trizol法提取的大鼠耳蜗PO蛋白与传统的蛋白裂解液裂解法提取的含量相当，效果肯定。结论Trizol法与传统的蛋白裂解液裂解法提取的蛋白效果相当，但Trizol法简化了操作步骤，节省了单独提取蛋白质所需的蛋白酶抑制剂，节约样本，节省时间，提高工作效率，减少了蛋白和核酸降解的机会，有着更好的前景。【关键词】大鼠：耳蜗：髓磷脂P0蛋囱质Theinvestigationofthemethodofextractingtherat。ScochleamyelinproteinzerowithTrizolTANGLil，ZHENGMingxiul．LEIL产．Q／Ruomei8(1DepartmentofOtoIaryngoIogyHeadandNeckSurgery，theSecondAffiliatedHospitalIofKunmingMedicalCollege，Kunming，Yunnan【，650101，China；2DepartmentofOtoIaryngOIOgyHeadandJNeckSurgery，BeijingTongrenHospital，CapitalMedicalUniversity。KeyLaboratoryofOtolaryngologyHeadand内耳螺旋神经节及蜗神经髓鞘上存在髓磷脂P0蛋白质(myelinproteinP0，P0蛋白)，相对分子量为30000‘”。内耳PO蛋白可能是某些自身免疫性内耳病的自身抗原m21。大鼠内耳P0蛋白与核酸水平的研究无论是对于内耳功能的深入了解，还是对内耳疾病如感基金项目：国家自然科学基金资助项目(30471869)第一作者简介及通讯：汤黎，女，山东人，在读医学硕士，主要研究方向为耳科学。Email：lily_4—13@126．com通讯作者：雷雳(Email：kunhan_2005@yahoo．com．cn)NeckSurgery(CapitalMedicalUniversity)，MinistryofEducation，Beijing。100730，China；3BeijingInstituteofSenileDiseaseofMinistryofPublicHealth，Beijing，100730，China)Correspondingauthor：LEILi(Email：kunhan_2005@yahoo．com．cn)【ABSTRACT】OBJECTIVEToextractrat’scochleamyelinproteinP0byTrizoIandcomparedwiththeproteinextractingmethodofdecompositionfluidinordertofindtheadvantageofTrizolmethod．METHODSCochleamyelinproteinP0oftheWistarrat(2009-2509)wasextractedbyTrizolandthetraditionalproteindecompositionfluidcracksolutionseparately’¨authenticatedbyWesternBlottingandBradford．RESULTSThecontentandeffectoftwomethodSofextractingrat。ScochleamyelinproteinP0aresimilar．CONCLUSIONThee仟ectoftwomethodsofextractingtheproteinwassimilar，butthemethodofTrizoIhadImoreadvantages．SuchasItcansimplifythesequenceofoperation，savethetime，enhancetheworkingefficiency，moreoverreducethepossibilityofIproteinandRNAdegradation．SOtheTrizoImethodhasthebetterprospect．【Keywords]Rats；Cochlea；MyelinP0Protein音神经性聋、梅尼埃病、听神经病等发病机制的研究都具有重要的意义，其中如何有效提取至关重型31。目前国内尚缺乏对活体动物实验中大鼠耳蜗P0蛋白提取的相关文献报道，本实验通过蛋白免疫印迹(WesternBlot)法与考马斯亮兰法将Trizol法对大鼠耳蜗P0蛋白的提取效果和传统的蛋白裂解液裂解法进行比较，分析Trizol法的优势。1．1材料。Trizol试剂(购自invitrogen公司)；190CHINARCHOTOLARYNGOLHEADNECKSURG／April2008，V01．15，No．4中国耳鼻咽喉头颈外科／2008年4,q，第15卷，第4期TritonX-100(购自SIGMA公司)：PMSF、Leupeptin(购自SlGMA公司)；抗MPZ抗体(购自Abcam公司)，抗口-actin抗体(购自SantaCruz公司)；EDTA、PDTC、DTT、考马斯亮蓝、二巯基乙...