·论著·[收稿日期]2003207210;[修回日期]2004203220[作者简介]樊淑彦(1957-),女,河北藁城人,河北医科大学药学院副教授,从事药物质量标准建立的研究。比色法测定荷叶中总黄酮的含量樊淑彦,曹晓芳,刘淑萍,侯海妮,冀国荣(河北医科大学药学院分析化学教研室,河北石家庄050017)【摘要】目的利用黄酮类化合物可与金属离子形成有色螯合物的机理,用比色法测定荷叶中总黄酮的含量。方法KAc2AlCl3体系与荷叶总黄酮提取物反应,用比色法测定其结果。结果用KAc2AlCl3体系络合化学吸光法测定荷叶中总黄酮的含量为5.08%,平均回收率为101.2%,RSD=2.41%(n=5)。结论KAc2AlCl3体系络合化学吸光法易推广,呈色稳定,干扰小,容易掌握。【主题词】比色法;莲;黄酮【中图分类号】R282.71【文献标识码】A【文章编号】100723205(2004)0420215203MEASUREMENTOFTOTALFLAVONECONTENTSINLOTUSLEAFBYCOLORIMETRYFANShu2yan,CAOXiao2fang,LIUShu2ping,HOUHai2ni,JIGuo2rong(DepartmentofChemicalAnalysis,theSchoolofPharmacy,HebeiMedicalUniversity,Shijiazhuang050017,China)ABSTRACT:ObjectiveTodeterminethecontentsoftotalflavoneinlotusleafbycolorimetrythatutilizethefactthatthemixtureofflavonecompoundswithmetalironcanformcolourfulcompounds.MethodsTocarryonareactionbetweentheextractionoftotalflavoneinlotusleafandthesystemofKAc2AlCl3,determinedbycolorimetry.ResultsTheaveragecontentoftotalflavoneinlotusleafis5.08%,withanaveragerecoveryof101.2%andrelativestandarddeviationof2.41%.ConclusionThismethodissimple,easytolearn,andwithgoodreproducibility.MeSH:colorimetry;Nelumbonucifera;Flavone荷叶为睡莲科植物莲的干燥叶,分布于我国的大部分地区。1991年11月中华人民共和国卫生部卫监发(1991)第45号文件中,荷叶被列入第二批“既是食品又是药品”的名单之中,荷叶在食用及药用两方面均有较广泛的应用。在荷叶的众多化学成分中黄酮类化合物具有明显的生物活性和生理功能,具有抗氧化、抗衰老、治疗心脑血管疾病、降血脂等药用保健功能[1,2]。因黄酮类化合物能与金属离子形成稳定的呈色螯合物,选择合适的络合体系测定荷叶黄酮的含量,对荷叶的开发利用有重要意义。本文采用以芦丁为对照品,应用KAc2AlCl3络合体系测定其含量。1实验仪器及试剂日本岛津UV22100紫外分光光度仪,芦丁对照品(中国药品生物制品检定所提供),95%乙醇,石油醚,2.5%AlCl3,1%KAc(均为分析纯)。2实验方法和结果2.1测定方法依据:以芦丁为对照品测定荷叶中总黄酮的含量,加入铝离子试剂,同时控制适宜的pH值,使黄酮化合物与铝盐形成络合物在可见区能获得稳定的特征吸收峰。2.2最佳比色条件的选择:取供试品适量,以吸光度值为指标,做正交实验。参加实验的因素有A:1%KAc,B:2.5%AlCl3,C:放置反应时间(每个因素所取的水平见表1)。通过正交试验确定最佳显色条件为A2B1C1,即1%KAc5.0ml,2.5%AlCl33.0ml,30min,结果见表2。·512·第25卷第4期2004年7月河北医科大学学报JOURNALOFHEBEIMEDICALUNIVERSITYVol.25No.4July2004表1实验因素水平Table1ExperimentfactorleverLeverFactorA(v/ml)B(v/ml)C(t/min)13.03.03025.04.03537.05.040表2正交试验设计和结果Table2OrthogonalexperimenttableandresultsExperimentnumberLinenumber123A11110.44221220.35131330.23042120.52952230.41462310.52173130.19883210.30493320.357K1j0.3410.3900.422-K2j0.4480.3560.412-K3j0.2860.3690.281-R0.2020.0340.141-2.3样品溶液的制备:干荷叶粉碎后,过60目筛,精密称定1g,以1∶25和1∶15固液比的50%乙醇水溶液浸泡,加少许碳酸钙,称重。至荷叶完全沉降,在沸点回流两次(每次3h),冷却至室温,再次称重,补足重量,抽滤,合并滤液,转移至分液漏斗中,加等体积的石油醚萃取3次,将下层乙醇液放出至量瓶中供分析用[3]。2.4标准品溶液的制备:精密称定干燥至恒重的芦丁对照品20.06mg,置100ml量瓶中,加60%乙醇适量,超声使完全溶解,稀释至刻度,摇匀。精密量取25.00ml置50ml量瓶中,用水稀释至刻度(含芦丁10.03mg/ml),备用。2.5测定方法和结果2.5.1测定波长的选择:取标...
