siRNA体内导入策略VIP免费

424综述与讲座siRNA体内导人策略章清华方佩华‘关键词RNA，小分子干扰RNA干扰载体综述[文献类型】以smallinterferingRNA(siRNA)为基础的RNA干扰(RNAinterfering，RNAi)，是指当与内源性mRNA编码区某段序列同源的双链RNA(dsRNA)导入细胞后，该mRNA发生特异性降解，而导致该基因表达的沉寂。是一种dsRNA分子在mRNA水平上关闭相应序列基因的表达或使其沉默的过程，也就是序列特异性的转录后基因沉默(post—transcriptionalgenesilencing，PTGS)。然而，随着研究的深入，如何把siRNA导入试验动物或是人体内成为该技术进一步推广应用的瓶颈，本文旨在对这一问题的研究进展作一综述。未经修饰的裸siRNA在体内容易被降解，半衰期短，无法维持有效药物浓度，为此需对其进行化学修饰或借助某些载体。由于病毒性载体均可以诱导机体产生某种程度的免疫反应，存在着插入突变等致瘤、致毒的风险，制备和生产困难等，而非病毒载体由于无传染性、可大量制备、可重复注射、稳定性好、目的基因表达可以控制、使用方法简单易行和能够像常规药物一样应用等优点而受到许多研究人员和临床医生的关注，为此，本文涉及的载体均为非病毒载体。1siRNA的一般药代学特性未经修饰的裸的siRNA分子质量一般在13000n左右，而肾小球对于分子质量小于50000n的分子(直径大约6nm)很容易将其通过肾小球滤过而分泌到尿液中排出体外。Santel等lll观察到将Cy3标记的siRNA注射到体内后20min可见于肾脏，其他脏器均未发现。VandeWater等阁发现裸的⋯In]siRNA注射到体内后，也发现siRNA首先聚集在肾脏，并通过尿液排出体外，注射后1h，肾脏中检测到的放射性是其他脏器的40倍。这些结果可以解释为siRNA对组织并没有特异性，之所以优先在肾脏中聚集，是由于肾脏的生理特点和siRNA的本身特点如分子质量、电荷性质所决定的。2系统给药的策略2．1化学修饰正常的siRNA结构中的磷酸二酯结构(PO)对内切酶敏感，也不利于细胞摄取，然而将S(Ps)代替磷酸二酯结构中的o(Po)，或是对其中五碳糖中的2一O进行甲基化后，可以延长双链siRNA存留时间。Layzer等p在体内研究发现，修饰后的双链siRNA可在体内保持7d。近来，还有将siRNA连接到聚乙二醇(PEG)进行修饰的报道吲。2．2快速静脉输注法通过静脉快速注射可以使siRNA在体内维持一定浓度，最初研究发现通过对小鼠尾静脉持续的快速输注特定的siRNA注射可以分别使caspase一3、easpase一8的mRNA及蛋白水平下降。Matsui等‘习发现该方法也能有效抑制mdda基因表达。23阳离子聚合物阳离子聚合物分为天然和合成的两类，其转运效果基于siRNA与聚合物的比例、siRNA的量、聚合物的分子量及结构特点。目前应用较为广泛的是合成聚合物——聚乙烯亚胺(PEI)，Urban—Klein等旧通过腹腔注射siRNA和PEI的复合物，每周2—3次，发现能明显抑制肿瘤生长。异型胶原是通过胃蛋白酶处理过的I型胶原，属天然阳离子聚合物，Takeshita等f7l通过静脉注射siRNA和异型胶原复合物，也成功抑制了小鼠骨转移瘤。2．4脂质体脂质体的转运效果取决于脂质类型、复合物电荷比、复合物分子大小及siRNA的量。目前常用的脂质体有阳离子脂质体，聚乙二醇脂质体和半乳糖基化的脂质体，此外还有中性脂质体。阳离子脂质体是应用比较成熟的一种脂质体，l，2一二油酰一3一三甲铵基丙烷(DOTAP)是其中较为常用的一种。Hassan等嘲通过将针对血管加压素V2受体的siRNA和DOTAP的混合物静脉注入小鼠体内，取得很好的效果。Santel等⋯观察了不同脏器中裸siRNA和阳离子脂质体复合物的分布情况，他还进一步观察了经化学修饰后的siRNA和阳离子脂质体复合物的分布情况[91。2005年，Landen等l-呀U用中性脂质体包裹的siRNA对小鼠实体瘤进行试验，发现该方法瘤内siRNA含量比单纯siRNA和阳离子脂质体复合物法都高。最近，Zimmennann等IlI利用聚乙二醇脂质体包裹的针对载脂蛋白B的siRNA静脉注射入猴体内(1或2．5mg／kg)，抑制率达90％。2007年，Sato等112报道利用半乳糖基化的阳离子脂质体包裹的siRNA对肝脏表达的内源性基因一ubcl3进行成功抑制。3局部导入策略目前，有很多关于局部将siRNA导入体内的报道，多集中在一些表浅器官。3．1眶内注射在眼部疾病中，...