血清总胆红素和结合胆红素测定[1]VIP专享VIP免费

1燕德起2血清总胆红素和结合胆红素测定改良J-G法测定血清总胆红素和结合胆红素胆红素氧化酶法测定总胆红素和结合胆红素3改良J-G法测定血清总胆红素和结合胆红素【原理】血清中结合胆红素可直接与重氮试剂反应，产生偶氮胆红素；非结合胆红素须有加速剂咖啡因-苯甲酸钠-醋酸钠作用，其分子内氢键破坏后才能与重氮试剂反应，也产生偶氮胆红素。本法重氮反应pH6.5，最后加入碱性酒石酸钠使紫色偶氮胆红素(吸收峰530nm)转变成蓝色偶氮胆红素，在600nm波长比色，使检测灵敏度提高。4改良J-G法测定血清总胆红素和结合胆红素【试剂】1．咖啡因-苯甲酸钠试剂称取无水醋酸钠41.0g，苯甲酸钠38.0g，乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na2)0.5g，溶于约500ml去离子水中，再加入咖啡因25.0g，搅拌使溶解(加入咖啡因后不能加热溶解)，用去离子水补足至1L,混匀。滤纸过滤，置棕色瓶，室温保存。2．碱性酒石酸钠溶液称取氢氧化钠75.0g，酒石酸钠(Na2C4H4O6?2H2O)263.0g，用去离子水溶解并补足至1L，混匀。置塑料瓶中，室温保存。3．72.5mmol/L亚硝酸钠溶液称取亚硝酸钠5.0g，用去离子水溶解并定容至100ml，混匀，置棕色瓶，冰箱保存，稳定期不少于3个月。作10倍稀释成72.5mmol/L，冰箱保存，稳定期不少于2周。4．28.9mmol/L对氨基苯磺酸溶液称取对氨基苯磺酸(NH2C6H4SO3H?H2O)5.0g，溶于800ml去离子水中，加入浓盐酸15ml，用去离子水补足至1L。5．重氮试剂临用前取上述亚硝酸钠溶液0.5ml和对氨基苯磺酸溶液20ml，混匀即成。6．5.0g/L叠氮钠溶液。5改良J-G法测定血清总胆红素和结合胆红素【试剂】7．胆红素标准液•(1)目前一般用游非结合胆红素配制标准液，此标准品须用含白蛋白的溶剂配制，常用人混合血清，对此血清的要求如下：•收集无溶血、无黄疽、无脂浊的新鲜血清，混合，必要时可用滤菌器过滤。取过滤后的血清1ml，加入新鲜0.154mmol/LNaCl溶液24ml，混合。在414nm波长，1cm光径，以0.154mmol/LNaCl溶液调零点，其吸光度应小于0.100；在460nm的吸光度应小于0.04。•(2)配制标准液的胆红素须符合下列标准：纯胆红素的氯仿溶液，在25℃条件下，光径1.000±0.001cm，波长453nm，摩尔吸光系数应在60700±1600范围内；改良J-G法偶氮胆红素的摩尔吸光系数应在74380±866。•(3)胆红素标准贮存液(171μmol/L)准确称取符合要求的胆红素10mg，加入二甲亚砜1ml，用玻璃棒搅拌，使成混悬液。加入0.05mol/L碳酸钠溶液2ml，使胆红素完全溶解后，移入100ml容量瓶中，以稀释用血清洗涤数次并入容量瓶中，缓慢加入0.1mol/L盐酸2ml，边加边摇(勿用力摇动，以免产生气泡)。最后以稀释用血清定容。配制过程中应尽量避光，贮存容器用黑纸包裹，置4℃冰箱3d内有效，但要求配后尽快作标准曲线。6改良J-G法测定血清总胆红素和结合胆红素【操作步骤】混匀后，波长600nm，对照管调零，读取吸光度，在标准曲线上查出相应的胆红素浓度。7改良J-G法测定血清总胆红素和结合胆红素标准曲线制作混匀(不可产生气泡)，按总胆红素测定法操作。每一浓度作3个平行管，并分别做标准对照管，用各自的标准对照管调零，读取标准管的吸光度。配制标准液用的溶剂血清中尚有少量胆红素，同样测定后得一吸光度值。每个标准管的吸光度值均应减去此吸光度，然后与相应胆红素浓度绘制标准曲线8改良J-G法测定血清总胆红素和结合胆红素【参考范围】血清总胆红素：5.1～19μmol/L(0.3～1.1mg/dl)；血清结合胆红素：1.7～6.8μmol/L(0.1～0.4mg/dl)。【临床意义】1．血清总胆红素测定的意义•(1)有无黄疸及黄疸程度的鉴别。•(2)肝细胞损害程度和预后的判断胆红素浓度明显升高反映有严重的肝细胞损害。但某些疾病如胆汁淤积型肝炎时，尽管肝细胞受累较轻，血清胆红素却可升高。•(3)新生儿溶血症血清胆红素有助于了解疾病严重程度。•(4)再生障碍性贫血及数种继发性贫血(主要见于癌或慢性肾炎引起)，血清总胆红素减少。9改良J-G法测定血清总胆红素和结合胆红素【临床意义】2．血清结合胆红素测定的意义结合胆红素与总胆红素的比值可用于鉴别黄疸类型。•(1)比值＜20%溶血性黄疸，阵发性血红蛋白尿，恶性贫血，红细胞增多症等。•(2)比值40%～60%肝细胞...