原发性肝癌组织库及数据库的建立VIP专享VIP免费

原发性肝癌组织库及数据库的建立目的：建立原发性肝癌组织库及数据库，通过对肝癌患者的血液、新鲜组织、病理蜡块等标本的收集、保存和研究，对其进行科学的管理和质量控制，为肝癌的基础和临床研究提供宝贵材料，并能为肿瘤患者的个性化治疗和随访提供帮助。材料：肿瘤患者血液样本及肿瘤标本。纳入标准：诊断为原发性肝癌或原发性肝癌转移的患者。患者对血液、样本采集均知情同意，符合医学伦理学标准。排除标准：其他肿瘤转移到肝脏上的患者予以排除。所需试剂及仪器：我科均已配置采集前准备：术前一天安排采集标本人员，填写肝癌标本临床资料表（对具有诊断意义的影像学资料进行照相留影存档），请患者或家属签署知情同意书，确认转移式液氮罐充满液氮，消毒灭菌两套手术标本采集器械（手术刀、手术剪、手术镊、不锈钢标尺、锡箔纸、冻存管）。手术当天携带冰盒、转移式液氮罐、标本采集器械、10%福尔马林溶液、照相机、标记好的冻存管（标本库专用标记码）、肝癌标本资料表等，提前入手术室准备好标本采集台，铺无菌手术巾，做好标本采集的准备。1.血清和血浆的采集及处理：1.液氮罐2.-80℃超低温冰箱3.4~-20℃冰箱4.离心机2.组织标本的处理和保存：患者按术前、术中、术后当天、术后1周等不同时间段取血，每次采6mL1份3mL不抗凝，室温静置2h，2000r/min离心10min加样器吸取血清，每管100μL分装，作蛋白组学分析1份3mLEDTA抗凝，采血后轻轻颠倒混匀3次静置，防止溶血抗凝2h内分离血浆：2000r/min离心10min。每管100μL分装3mLN.S+3mL抗凝静脉血，再加等体积Ficoll分离液至液面上，2000r/min离心10min在界面白膜处吸取淋巴细胞，N.S漂洗3次，沉淀于冻存管上述标本编号、作好标记，在采血后3h内冻存在-80℃冰箱中手术结束后在不影响病理诊断取材需要的前提下采集组织样本。整个切取标本的过程应控制在20分钟内。3.标本的标记和储存3.1标本分装入冻存管。标记：冻存管编号、患者姓名、住院号、疾病种类、组织部位(或血清、血浆)、标本收集日期、标本入库日期。新鲜组织的采集及保存石蜡固定标本的采集10%福尔马林固定，24小时后制石蜡标本块，存放于4℃冰箱。切片、染色。每例患者均保存2张H-E染色切片，明确病理诊断。生理盐水冲洗2次，取肿瘤组织、癌旁组织(癌组织旁1cm)、正常组织(癌组织旁3~5cm以外或最远处)。将标本切成小块(0.5cm×0.5cm，厚度<0.5cm)，用锡箔纸包好减少组织脱水，放入冻存管中（每管中放置2-3块），标记后放入液氮保存。用于提取RNA及蛋白的组织组织标本切成厚度小于0.5cm小块，放入灭菌的EP管中，迅速放入冰盒冰盒EP管中的组织块利用RNAFast200和RIPA裂解液分别提取总RNA和蛋白。标本的RNA行1%琼脂糖凝胶电泳。若A260/A280>1.6，28S和18S条带清晰明亮，且28S亮度强于18S，比值在2左右，则完整性良好。若比值<1，则RNA已降解。总蛋白测定浓度后加入5xloadingBuffer并在100℃煮5min变性后放入-20℃冰箱中保存。总RNA样本利用Fermentas反转录试剂盒逆转录成cDNA入-20℃冰箱保存剩余RNA样本-80℃低温冰箱保存。3.2冻存管编号由存放位置坐标确定。3.3数据库的管理。采用EXCEL软件。3.3.1患者信息录入：包括患者的姓名、性别、年龄、民族、职业、联系方式、随访时间、住院号（如多次住院则详细记录每次住院号）、临床诊断、病史摘要（主要记录有无肝炎、阳性家族史、黄疸、腹水、肝功Child分级等肝癌相关情况）、手术情况（包括手术方式、日期、术中探查所得重要信息、术中出血量等）、病理诊断（病理号）。患者辅助检查信息：检查项目、检查日期、检查结果等。3.3.2标本信息录入：（A）病理信息：肿瘤体积、组织类型、分级、浸润深度、切缘情况、门脉及肝门淋巴结情况。（B）标本基本信息：入库编号、入库时间、入库类别、病变部位、标本描述（附照片）、标本采集时组织离体时间、收集人、保存方式、初步处理方式。（C）存放位置信息：存放位置坐标。3.3.3标本使用管理：包括使用登记、标本原始位置、使用单位、使用人、经手人等3.3.4标本废除管理：包括废除登记、标本原始位置、废除日期、废除原因、审批人等。标本库的系统管理：标本的采集、保存、使用实...