分离根瘤菌用的选择培养基‘许月蓉�中国科学院南京土壤研究所�在研究根瘤菌生态学时,通常需要测定接种的根瘤菌株在土壤中的数量变化,以了解其存活和消长情况。植株感染法则是常用的方法,但此法手续冗繁,周期长,近来有渐为耐药菌株和某些选择性培养基分离计数法所替代之势,但有些选择性培养基并不能完全阻止杂菌的生长,尤其是那些铺展性强的真菌能抑制根瘤菌的生长,从而影响计数另一方面,有些选择培养基所用的抗菌素因药源紧,价格贵,而在使用上受到限制,本文推荐的选择培养基则可克服上述各缺点。一、材料和方法�一�培养基和抑菌剂!∀基础培养基#用根瘤菌培养基∃∃加硫酸盐链霉素�每升培养基加硫酸盐链霉素。∀%克,浓度为&∋∋(()�。∗∀通用选择培养基基础培养基加放线酮�每升培养基加放线酮+∀巧克,浓度为!%+,,)�。�−�本文推荐的选择培养基由基础培养基及五氯硝基苯�可湿性粉剂,含有效成份.+/�多菌灵�可湿性粉剂含有效成份!+/�和结晶紫等三种抑菌剂组成。其中除结晶紫外,其余抑菌剂均在培养基灭菌后冷却至约0+℃时加入,混匀,制成平板,于1%℃烘箱中除去表面冷凝水,备用。�二�供试菌株!∀耐23+(()硫酸盐链霉素的曹子根瘤菌2一.!−+。∗∀菌落中央有一个白色的小圆点的若子根瘤菌0+−1。�三�供试土壤水稻土�采自无锡和南京�、黄棕壤�采自南京和山东�、红壤�采自江西�及灰壤�采自山东�。�四�试验方法将菌龄%一.天的2一.!−。菌株斜面培养物,加灭菌水−毫升及一滴分散剂�吐温4+�,充分振荡摇匀,制成菌悬液。吸取+∀+%毫升菌悬液移入!+/的土壤悬液中,振荡!%分钟,吸取此液+∀+%毫升于琼脂平板上,用刮刀均匀涂抹,∗4℃培养.天左右计数。本文承李良说同志指正,谨致谢意。根瘤菌培养基成份如下#葡萄糖!+克,567,31+∀%克,酸溶液∗毫升,醉母奋+∀1一!∀+克,89:;∋∀<克,=>23‘·.7?++∀∗克,:9:+&;∀%克,?/铝酸钠溶液∗毫升;/硼!≅∗++刚果红%毫升琼脂∗+克,水!+++毫升,(7调至.∀+。!%+二、结果和讨论�一�选择培养基的组成介培养试验结果�表!、∗�表明#�!�含有五氯硝基苯的培养基对真菌有明显的抑制作用,尤其是对根霉、毛霉和木霉真菌效果更佳,但对青霉、曲霉的抑制作用较少。在−+毫升基础培养基中加入。∀!一+∀0克五氯硝基苯的条件下,其抑制真菌的能力几无差异�∗�含有多菌灵的基础培养基其抑制真菌的能力高于含五氯硝基苯的基础培养基,多菌灵含量愈高抑制作用愈大,但此培养基对根霉、毛霉和木霉等铺展性强的真菌几乎没有抑制效果�−�含有结晶紫表!含抑菌剂的培养基对土壤真菌数量的影响个≅克干土一ΑΒΒ一;ΒΒ一‘生一一一一生二一进一ΒΒΒΒΒΒ一’〔试“数Α基础培、基Α一户些恳塑燮竺Β一Α一胜矛竺翌“勺擎竺ΒΒΒΒΒΒΒ一Α一二#二一Χ一丁瞥一Χ理牛�二嘿一Α一Χ一∗克’Χ。一克灰Δ恻山东,Α根得铺满Α根娜铺满Α根每铺满Α根哪铺满Ε”·%0⋯‘+∀0.Α’1∀∗,水稍土‘无锡,⋯“+!·%!”·‘,Α“·”!“·“%ΧΦ·“,Α“·”+Α“·“4黄棕圾‘南河,Χ‘+·%∗Α“·,1Χ“·,0Α”·∗−】“·“∗Χ’%·044·01∀红Δ笋江邓’,Χ、#∗民−4Χ“」Δ上。∀Χ+∀∀一今毕一旅吧一Χ一Γ土∃−+。逸升荃础培养荃加入的抑菌剂量表∗%一.!−。根瘤菌株在含结晶紫的培养基平板上的数量�个≅克干土�的基础培养基对细菌的抑制能力随其浓度而异,浓度高时,所有细菌几乎均不能在其上生长浓度低时,对任何细菌均无杀伤能力只有在浓度适中时,即浓度在−∀1一0∀&(()时抑制作用方有选择性。根据上述试验结果,本文所推荐的选择培养基的组成规定为#每−+毫升基础培养基加入!/结晶紫溶液+∀!一+∀∗毫升五氯硝基苯�可湿性粉剂�+∀!克和多菌灵�可湿性粉剂�+∀!克。�二�选择培养基的优点一�一�!∀�#!。∃�#!%。一一哎&∋匕(一)∋,一∗+,−��,二孟任卜�斗一.一.十一十一一/0一1口一+‘毯/口一+一的口,口,&,22性一培养荃类型基础培养基通用培养基含结品紫�!3456的培养基含结晶紫7!556的培养基含结晶紫8!9556的培养基含结晶紫�#!%556的培养荃注:又表示菌落平均数;个<皿=,>表示标准差,?!≅!表示变异系数�!抑制真菌生长从>...
