．基础研究．高糖上调内皮细胞间黏附分子1和血管细胞黏附分子1表达的作用机制农善伟柯丽琴张小勇黄秀清满永王抒黎健宁应之·219·【摘要】目的探讨高糖上调内皮细胞间黏附分子1(ICAM．1)和血管细胞黏附分子1(VCAM．1)表达的作用机制。方法高浓度葡萄糖(20retool／L)处理分离培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)，以2’-7’．二氯荧光索双醋酸盐(DCFH·DA)标记流式细胞仪检测细胞内活性氧(aos)。Westernblot分析细胞内抑制性蛋白KB(IKB)和核转录因子-KB(NF-KB)蛋白表达和磷酸化水平。免疫荧光法检测NF-KB的活化。结果高糖处理HUVECs后，伴随ROS的显著升高，IKB蛋白明显下调，磷酸化的IKB和NF-KB均增多，使NF．KB移位至细胞核内，导致ICAM．1、VCAM·l的表达明显增强。结论高糖通过刺激ROS的产生和NF-KB的活化上调内皮细胞ICAM-I和VCAM．1黏附因子的表达。【关键词】葡萄糖；内皮细胞；活性氧；细胞黏附分子Mechanismunderlyingup-regulationofICAM-1andVCAM-1expressionsinducedbyhigh#ucoseinendothelialcellsNONGShan-wei+，KELi—qin，ZHANGXiao-yong，HUANG尼“一qing，MANYong，WANGShu，LIJian，NINGYing-zhi．’NorthwestNormalUniversity，Lanzhou73DD7D，ChinaCorrespondingauthors：NINGYing-zhi，Email：ningyz@nwnu．edgO'g；12Jian，Entail：lijian@跏moh．饥【Abstract】ObjectiveToinvestigatethemechanismunderlyingup-regulationofICAM·IandVCAM·1expressioninducedbyhiShSluc雠inendothelialcells．MethodsCulturedhumanumbilicalveinendothelialcells(HUVECs)wemtreatedwith20mmol／Lslnco鸵，andcellularreactiveoxygenspecies(ROS)levelwasdetectedbyfloweytometry．WesternblotwasappliedtoanalyseexpressionandphosphorylationofIKBandNF-KB．TheactivationofNF-xBWAgmeasuredbyimmunofluoreacence．ResultsTreatmentofHUVECswith20mmol／LSlu嘲edecreasedIKBlevelandstimulatedthephosphorylationofIKBandNF—KB．andaccompaniedbyincreasedROSleveLNF—KBwastranslocatedintonucleuswhereNF-KBup—reguhtedtheexpressionsofinflammatoryfactorssuchasICAM-IandVCAM-1．CondusionsHighglucoseup—regulatestheexpressionsofICAM一1andVCAM—lviathestimulationofROSgenerationandtheactivationofNF．KBpathway．【Keywords】Glucose；Endothelialcells；Reactiveoxygenspecies；Celladhesionmolecule糖尿病是心血管疾病的重要危险因素，其中血糖异常是糖尿病患者血管并发症的重要原因之一，高糖导致内皮细胞发生特异的功能异常和形态改DOI：10．3969／j．issn．1007·54lO．20lO．03．016基金项目：国家自然科学基金项目(30440065、30572082、30870273)、北京市自然科学基金资助项目(7052059)作者单位：：730070兰州，西北师范大学(农善伟、宁应之)；卫生部北京医院老年医学研究所(柯丽琴、张小勇、黄秀清、满永、王抒、黎健)通讯作者：黎健，电子信箱：lijian@bjhmokon；宁应之，电子信箱：ningyz@nwnu．edILcn注：农善伟、柯丽琴为并列第一作者；黎健、宁应之为并列通讯作者变，是血管并发症的早期标志。研究表明，高糖具有一定的细胞毒性，可延长内皮细胞的增殖，破坏细胞周期，增加DNA损害，加速细胞凋亡。高糖还可调节黏附分子的表达并增加中性白细胞和单核细胞对内皮细胞的黏附⋯。另据报道，高糖可导致内皮细胞中活性氧(reactiveoxygenspecies，ROS)生成增加，并导致细胞凋亡[2_3】。ROS作为细胞信号传导通路中的重要信号分子，在内皮细胞的生长与损伤中起关键作用。过多的ROS可刺激内皮细胞产生细胞问黏附分子1(intercellularadhesionmolecule1，ICAM-1)和血管细胞黏附分子1(vascularcelladhe．sionmollie1，VCAM-1)等黏附因子，造成炎症细胞浸润，加重血管内皮损伤。万方数据本研究以人脐静脉内皮细胞(humanumbilicalveinendothelialcells，HUVECs)为细胞模型从ROS生成和核转录因子KB(nuclearfactor—KB，NF—xB)活化角度探讨高糖上调内皮细胞ICAM．1和VCAM一1黏附因子表达的作用机制。1材料与方法1．1材料M199培养基、青霉素和链霉素为Gibco产品；...
