常规标本的制作和常规标本的制作和HEHE染色染色薛辉吉林大学基础医学院切片的一般程序切片的一般程序封固石蜡切片取材固定(24-48h)脱水(70,80%4h;90,95%2h,100%1h(2))透明(二甲苯10min(2))浸蜡(30min(3))包埋切片染色显微标本制作技术显微标本制作技术从保存时间长短分，有临时玻片标本和永久玻片标本。从制作的方法来分，有涂片、压片、装片(也叫整装法)、磨片和切片等。切片法徒手切片法石蜡切片法火棉胶切片法冰冻切片法材料和夹持物切取的标本1.徒手切片法滴水滴水放置标本放置标本加盖盖玻片加盖盖玻片叶的横切叶的横切取材取材1.材料新鲜最好是动物的心脏还在跳动时取材，立即投入固定液内。应争取在死后半小时内处理完毕2.组织块力求小而薄,以不超过5毫米为在可能范围内也应力求短小。以使固定液能迅速而均匀地渗入组织块内部3.勿使组织块受挤压。取材时，组织块可稍取大一点。4.要熟悉取材的部位要能准确地按解剖部位取材，如胰腺，一般取胰岛较多的胰腺尾部，脊髓取腰膨大与颈形大5.选好组织块的切面纵切或横切往往是显示组织结构明晰的关键。6.保持材料的清洁组织块上如有血液、污物、粘液、食物、粪便等，可用生理盐水冲洗，然后再入固定液，但要注意防止组织损伤。空腔性器官注意横断面和纵断面保护内皮和粘膜横断：气管、食管、血管纵断：胃底、肠、心脏心瓣膜左心室左心房特殊的组织或者器官血液、骨髓：涂片肌肉、神经：骨、牙齿：脱钙切片酸固定的方法固定的方法1.蒸气固定法比较细小而薄的标本，可用饿酸或甲醛蒸气固定。主要用于血液或细胞涂片以及某些薄膜组织等的固。如血液涂片，则应在血片未干燥前就与饿酸蒸气接触2注射、灌注固定法.某些组织块由于体积过大或固定掖极难渗入内部或需要对整个脏器或整个动物进行固定。如肺可将固定液从气管或支气管注入.全身灌注固定较大动物如兔、猫、狗、猴及整个人体,固定液输入后，可不必即刻取材。小动物，如大、小鼠，也可灌流固定.3.小块组织固定法.从人体或动物取下的小块组织，须立即置入液态固定剂中进行固定，这是应用最广泛最经常的方法。固定的目的固定的目的1.迅速阻止组织、细胞的死后变化，防止自溶与腐败，使之尽量保持生前的状态与结构。2.使细胞内的蛋白质、脂肪、糖，酶等成分转变为不溶性物质，以保持其原有状态。3.使组织内各种物质成分产生不同的折光率，以便染色后易于鉴别和观察4.使组织块在脱水、包埋、切片、染色等过程中不易损坏。5使不同组织成分对染料有不同的亲和力，经过染色处理后易于辨认。6.防止细胞过度收缩或膨胀而失去其原有形态结构。7.使组织块硬化，便于制作薄片。注意事项及影响固定的因素注意事项及影响固定的因素1.组织块不宜过大，一般以厚度5毫米，长宽不超过15x15毫米。2.固定液的量一般以组织块大小的20倍为宜3.必须选择渗透力强，又不使组织过度收缩或膨胀的试剂做固定剂.石蜡切片标本的固定石蜡切片标本的固定固定液：10%中性福尔马林固定时间：室温3个小时，1个小时后修块。固定方法：容器底部垫上脱脂棉或者滤纸。肺脏：液体表面覆盖脱脂棉。空腔脏器：浆膜面平铺在纸板上用大头钉固定。胆囊放在单独的容器内。脑、脊髓、松软的肿瘤、病变组织：先固定后切开。脑最好悬吊在固定液中。睾丸、囊性组织：向腔内注入较高浓度的固定液。骨骼标本：剥离软组织后锯成小块固定。垂体等较小组织：擦镜纸包好滴少量伊红标记后固定。冲洗和保存经过长时间福尔马林固定和保存的组织要充分水洗，否则影响核的染色。一般置于70~80%酒精中40C保存。当酒精混浊时，更换新的酒精。固定易出现的问题与主要原因固定易出现的问题与主要原因扭曲变形与过度硬脆容器过小；标本数量过多；固定时间过长。取材过于薄小，尤其疏松结缔组织。表层过度，中间没有固定透取材过厚过大；固定时间不足；固定液失效。固定液浓度高、渗透力强，表面快速硬化。局部固定不佳组织与组织重叠；组织与容器接触；组织露出液面。注意：根据实验目的不同选择适当的固定液。脱水脱水（一）脱水的意义与目的常用的固定剂中含有很多水分，在石蜡或火棉胶包埋前。必须用某些溶剂...
