实验十一 多管发酵法测定水中大肠菌群VIP免费

多管发酵法测定水中大肠菌群多管发酵法测定水中大肠菌群考查内容：考查内容：一、预习报告（包括提问）一、预习报告（包括提问）二、操作（无菌操作，随机抽二、操作（无菌操作，随机抽看）看）三、实验报告三、实验报告实验十一(综合实验）多管发酵法测定水中大肠菌群多管发酵法测定水中大肠菌群一、实验目的一、实验目的二、实验原理二、实验原理三、实验材料三、实验材料四、实验步骤四、实验步骤五、实验报告五、实验报告一、实验目的一、实验目的11、学习测定水中大肠菌群数量的多管发酵法。、学习测定水中大肠菌群数量的多管发酵法。22、了解大肠菌群的数量在饮水中的重要性。、了解大肠菌群的数量在饮水中的重要性。发酵法：发酵法：又称多管发酵法或三步发酵法又称多管发酵法或三步发酵法1)1)初发酵（推测试验）：初发酵（推测试验）：将不同稀释度的水样，分别接种于将不同稀释度的水样，分别接种于含有乳糖等糖类的培养液中（含有乳糖等糖类的培养液中（33倍或倍或11倍乳糖倍乳糖液），经液），经37ºC37ºC培养培养24h24h，观察产酸产气情，观察产酸产气情况，培养基内加有况，培养基内加有溴甲酚紫溴甲酚紫作为作为PHPH指示剂，指示剂，细菌产酸后，培养基即由原来的细菌产酸后，培养基即由原来的紫色变为黄色紫色变为黄色，，以初步判断是否有大肠菌群存在。以初步判断是否有大肠菌群存在。二、实验原理二、实验原理22）平皿分离（证实试验））平皿分离（证实试验）水中除大肠菌群外，尚有其它细菌可能水中除大肠菌群外，尚有其它细菌可能引起糖类发酵，因此需要进一步证实。引起糖类发酵，因此需要进一步证实。将初发酵管中已发酵的菌液接种于伊红将初发酵管中已发酵的菌液接种于伊红美兰培养基，美兰培养基，3737ºCºC培养培养24h24h，根据菌落特，根据菌落特征（带核心的、有金属光泽的深紫色菌落），征（带核心的、有金属光泽的深紫色菌落），挑取可能为大肠菌群的菌落制片，经革兰氏染挑取可能为大肠菌群的菌落制片，经革兰氏染色，进一步证实是否为大肠菌群。色，进一步证实是否为大肠菌群。33）复发酵试验）复发酵试验((完成实验）完成实验）将上述可能为大肠菌群的菌落再次转将上述可能为大肠菌群的菌落再次转接入接入11倍乳糖培养液中，经倍乳糖培养液中，经3737ºCºC培养培养24h24h，，产酸产气者即最后确证为存在大肠菌群。产酸产气者即最后确证为存在大肠菌群。产酸、产气分别记为阳性反应，不产产酸、产气分别记为阳性反应，不产酸、产气则记为阴性反应；酸、产气则记为阴性反应；根据阳性管数量，查表求得水体大肠根据阳性管数量，查表求得水体大肠菌群的数量。菌群的数量。三、实验材料三、实验材料11、培养基：、培养基：乳糖蛋白胨发酵管（内有倒置小套管），乳糖蛋白胨发酵管（内有倒置小套管），三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管（瓶）（内有倒置小三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管（瓶）（内有倒置小套管），伊红美蓝琼脂平板，灭菌水。套管），伊红美蓝琼脂平板，灭菌水。22、仪器或其他用具：、仪器或其他用具：载玻片，灭菌带玻璃塞空瓶，灭菌吸载玻片，灭菌带玻璃塞空瓶，灭菌吸管，灭菌试管等。管，灭菌试管等。四、操作步骤四、操作步骤11．水样的采取实验室提供水样．水样的采取实验室提供水样22．河水的检查．河水的检查（（11）初（步）发酵实验）初（步）发酵实验水样的稀释：水样的稀释：1010-1-1与与1010-2-2接种：分别吸取接种：分别吸取1ml1ml1010-2-2、、1010-1-1和原水和原水样样接入装有接入装有10ml10ml普通浓度乳糖蛋白胨发酵管；普通浓度乳糖蛋白胨发酵管；另取另取10ml10ml原水样接入装有原水样接入装有5ml5ml三倍浓缩乳糖蛋白三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管，混匀后，胨发酵管，混匀后，37℃37℃培养培养24h24h，，24h24h未未产气的继续培养产气的继续培养48h48h。。（（22）平板分离）平板分离将经将经24h24h和和48h48h培养后产酸产气的培养后产酸产气的发酵管，分别划线接种于伊红美蓝琼脂平板上，发酵管，分别划线接种于伊红美蓝琼脂平板上，再于再于37℃37℃培养培养1818～～24h24h，将符合下列特征的，将符合下列特征的菌落...