实时荧光定量PCR方法检测人正常组织及癌组织中CD109蛋白的表达 (1)VIP免费

·626·免疫学杂志第22卷第6期2006年11月IMMUNOLOGICALJOURNALV01．22No．6Nov．2006[文章编号]1000-8861(2006)06．0626—04实时荧光定量PCR方法检测人正常组织及癌组织中CDl09蛋白的表达张静敏1，金宁一孙，连海2，李霄2，金毅2，安汝国1，高桥雅英3(1．吉林大学药学院生药学教研室，长春130021；2．军事医学科学院基因工程重点实验室，长春130062；3．名古屋大学医学部病理学研究室，日本名古屋)[摘要]目的CDl09是最近克隆到的一种细胞表面抗原，为糖基化磷脂酰肌醇联结的糖蛋白，属于含硫酯的啦巨球蛋白家族成员，本研究的目的是探讨CDl09基因在人正常组织及癌组织中的分布。方法使用实时荧光定量PCR方法分析了CDl09在人正常组织及癌组织中的表达。结果研究结果表明，该蛋白的mRNA丰度在睾丸组织中最高，而在其他组织中较低，在癌组织标本中检测到CDl09表达水平上调。结论以上结果提示表达在细胞表面的CDl09蛋白可能是治疗恶性肿瘤的一个潜在的分子靶点。[关键词]CDl09；实时荧光定量PCR；癌组织[中图分类号]R392．11[文献标识码]AReal-timequantitativepolymerasechainreactionforCDl09expressioninhumannormaltissueandcailcerZHANGJing-min，JINNing—yi，ElANHai，LIXiao，JINYi，ANRu—guo，TakahashiM(SchoolofPharmacy，JilinUniversity，Changchan130021，China)[Abstract]ObjectiveToinvestigatethedistributionofCDl09，acellsurfaceantigen，indifferenthumantissues．MethodsReal·timequantitativepolymerasechainreaction(Real—timePCR)wasusedtoanalyzeCDl09expressioninhumannormaltissueandcancer．Re·suitsThehighestlevelsofmRNAwerepresentintestis．OthertissuesexpressedlowlevelsofCDl09．Inaddition，up-regulationofC0109geneWasobservedincancer．ConclusionCDl09expressedonthecellsurfacemaybecomeausefulmoleculartargetforthedevelopmentofnewtherapeuticsformalignanttnrllors．[Keywords]CDl09gene；Real—timePCR；CancerCDl09是最近克隆到的一种细胞表面抗原，为糖基化磷脂酰肌醇联结的糖蛋白，属于含硫酯的a2巨球蛋白家族成员。曾在造血干细胞的一个亚群及祖细胞、激活的血小板和T细胞中发现该蛋白，但其生理功能一直不清楚⋯。CDl09的表达曾在造血干细胞中得到广泛研究，并检测到其在胎儿和成年人CD34阳性骨髓单核细胞亚群中表达。在CD34和cDl09阳性细胞亚群中发现了几乎所有的髓样红细胞和原巨核细胞的前体细胞，而在CD34阳性和CDl09阴性亚群中却未发现上述细胞，这意味着多数原始造血干细胞存在于CDl09阳性亚群中，但CDl09在成熟的血细胞中[收稿日期]2005一09—07；【修回日期]z006—04—11[作者简介]张静敏(1964一)，女，副教授，博士，主要从事细胞生物学方面的研究。(Tel)0431-5619706；(E-mail)jmzhang@jlu．edu．cn*通讯作者却检测不到[2—2|。我们应用实时荧光定量PCR方法研究了CDl09在成年人正常组织及癌组织中的相对表达，研究结果表明CDl09的mRNA丰度在睾丸组织中最高，而在其他组织中较低，在癌组织标本中检测到CDl09表达水平上调。1材料与方法1．1实验材料从AICHI癌症中心进行肿瘤手术切除的病人获得人正常组织及癌组织，组织样品立即冻于液氮中，然后保存于一80。C供提取RNA用。所有样品的取得均遵守现行的道德规范准则，并正式得到所有参与者和该研究各方的同意。该协议同时也得到AICHI癌症中心医院的同意。1．2RNA的分离及eDNA的获得将样品破碎后，用RNeasyMiniKit试剂盒从新鲜冻存的组织中提取总RNA，并进行无RNA酶的DNaseI处理。cDNA的万方数据第6期张静敏，等．实时荧光定量PCR方法检测人正常组织及癌组织中CDl09蛋白的表达·627·合成使用TaqMan反转录试剂盒，在10皿反转录缓冲液(包括5．5mmol／LMgCl：，2．5mmol／L随机6核苷酸引物，4URNA酶抑制剂和31．25UMuhiScribe反转录酶)对200ng的总RNA进行反转录，按以下步骤操作：25℃10min，37℃60min，95℃5min。1．3运用实时荧光定量PCR方法分析基因表达使用实时荧光检测方法对mRNA丰度进行定量。如上述获得的cDNA在ABIPrism7700序列检测器上进行扩增，人CDl09基因引物...