老鼠粪便中粪固醇的检测VIP免费

http://www.paper.edu.cn老鼠粪便中粪固醇的检测徐扬吉林大学生命科学学院，长春（130012）Email：liuran0211@163.com摘要：本文介绍了一种气相色谱/质谱选择离子模式（GC/MS-SIM)检测老鼠粪便中粪固醇的方法。在老鼠粪便中已检测出粪醇、差向异构-粪醇、胆固醇、24-乙基-粪醇等。结果表明，这些粪固醇可以作为老鼠粪便污染的指示物。关键词：老鼠，粪便，粪固醇，指示物中图分类号：X502文献标识码：A1.引言科学家早已发现，β-甾烷醇可以较好地鉴别各种动物的粪便来源。因而，很多研究已将这些生物标志物作为动物污染的指示物。5β-甾烷醇是一类典型的甾族类生物标志物，通常是由较高等动物肠中大肠杆菌作为触媒，将胆固醇（胆甾-5-烯-3β-醇）及其高分子同系物24-甲基-胆固醇（24-甲基-胆甾-5-烯-3β-醇）、24-乙基-胆固醇（24-乙基-胆甾-5-烯-3β-醇）、24-乙基-胆甾-5，22-二烯-3β-醇等，经△5双键氢化还原转化而形成的一系列甾族类化合物。上述生物加氢化反应，只形成5β-氢异构体，不能形成5α-氢异构体。5α-氢异构体，只有在需氧菌参与时才能形成[1，2]。胆固醇转化为粪醇（5β-胆甾-3β-醇），通常需要经历C-3位上羟基的一系列氧化过程，如形成胆甾-5-烯-3-酮、胆甾-4-烯-3-酮、5β-胆甾-3-酮等中间体[3-5]；形成的粪醇（5β-胆甾-3β-醇），是人粪便中主要的5β-甾烷醇，约占总固醇的60%[6]；在其它动物粪便中这种5β-C27甾烷醇含量较低；草食动物（如牛、羊等），因喂养富含C28菜油固醇和C29谷甾醇饵料，粪便中5β-C28甾烷醇和5β-C29甾烷醇的含量较高，如24-甲基-5β-胆甾-3β-醇、24-乙基-5β-胆甾-3β-醇；狗和鸟类粪便中很少含有5β-胆甾-3β-醇[7]；而狗粪便中富含胆固醇，鸟类粪便中却富含胆固醇和谷甾醇。用微生物学指标（如：耐热大肠杆菌thermotolerantcoliform等）不能鉴别狗和鸟类等粪便污染的来源[8]。5β-甾烷醇及其比值指标，已被应用于各种污染指示物的研究中[9-13]。Bethell等用5β-胆甾-3β-醇/24-乙基-5β-胆甾-3β-醇的比值指标作为污染指数，较好地区分了人类粪便与草食动物（如牛和羊）粪便的来源[14,15]。LeemingR等用5β-胆甾-3β-醇/（5β-胆甾-3β-醇+24-乙基-5β-胆甾-3β-醇）的比值指标，指示了不同来源的粪便污染状况[16]。目前，尚未见到有关老鼠粪便中粪甾醇测定的研究报道。鉴于此，本文应用毛细管GC/MS-SIM检测老鼠粪便中的粪甾醇，旨在为我国生态监测方法提供基础资料。2.材料和方法2.1样品来源在野外诱捕野生老鼠一只，放入干净木盒中，待老鼠排出粪便后，及时收集新鲜粪便，置于烧杯中，阴干后，转移到棕色玻璃瓶中，密封，于冰箱中冷冻保存，待处理。2.2仪器与试剂2.2.1仪器-1-http://www.paper.edu.cnAgilent6890/5973N气相色谱-质谱联用仪，毛细管柱（HP-5，30m×0.25mm×0.25μm），ZFA—型旋转蒸发装置，ULTRATURRAXZKAT18basic匀浆机，氮吹装置，分液漏斗（1L），KS-型康氏振荡器，浓缩瓶，马脑钵，80目过滤筛，棕色广口瓶。2.2.2试剂二氯甲烷（色谱级，Tedia，USA），无水硫酸钠（300℃下加热4h，干燥器中保存），佛罗里硅土（650℃下加热6h，加5%水，混匀后于干燥器中保存），正己烷（色谱级，Tedia，USA），甲醇（分析纯），氢氧化钠（分析纯），氮气（纯度99.99%），水（Millipore超纯水）。2.3实验方法2.3.1色谱条件色谱柱：HP-5ms,30m×0.25mm×0.25μm；载气：高纯氦气；柱流速：1ml/min；检测器：质谱EI检测；进样口温度：260℃；进样方式：无分流进样；进样量：1μl。柱温条件：初始温度80℃保持3分钟，然后以5℃/min的速度升温，在285℃保持16分钟。2.3.2质谱条件离子源：四级杆离子源；质量扫描范围mPz：50amu～550amu；电离方式：EI；电子能源：70ev；接口温度：280℃；离子源温度：230℃；四极杆温度：150℃；扫描方式：SIM，溶剂延迟：3min。2.3.3样品的前处理准确称取阴干后研磨均匀的老鼠粪便样品5.00g,置于烧杯中，加入50ml甲醇和一定量固体氢氧化钠，混匀，至溶液pH≥12。依次加入400ml水和50ml二氯甲烷，振荡5min，静置10min，分离水相和二氯甲烷相，将分离后二氯甲烷溶液，过填有1.0g无水硫酸钠和5.0g...