实时PCR技术在NG和CT筛查中的应用VIP专享VIP免费

实时PCR技术在NG和CT筛查中的应用金红芝杨志军摘要：本文简述了NG和CT感染概况与分离培养法、涂片镜检法、酶免测定法、常规PCR法、实时PCR技术等主要的检测技术，着重介绍了实时PCR技术在NG和CT筛查中的应用情况。关键词：NG，CT，实时PCR，筛查淋病（gonorrhea）和非淋菌性尿道炎（nongonococcalurethritis，NGU）是最常见的性传播疾病（STD），被卫生部列为重点防治的对象。淋病是由淋病奈瑟氏菌（Neissriagonorrhoeae，NG）引起的一种性传播疾病。人类是淋球菌唯一的自然宿主，主要通过性接触而传播。感染淋病之后，患者发生泌尿生殖系统的损害，男性发生尿道炎，女性引起尿道炎和子宫颈炎。如治疗不彻底，可扩散至生殖系统，引起不孕不育症。患者主要是年轻的成人，它严重影响着人们的身体、工作和生活质量。据近来世界卫生组织估计，全世界每年约有6200万新病例发生。在我国，目前其发病率排在性传播疾病之首，约占性病的56.67%～78.11%，1996年全国报告为202620例（17.3/10万），近2年仍有上升的趋势。据一些城乡健康妇女调查，其患病率约0.3～0.5%左右。沙眼衣原体（Chlamydiatrachomatis，CT）感染是引起非淋球性尿道炎的主要原因，其所致的泌尿生殖道感染占非淋菌性尿道炎的40%~50%。美国估计每年有300万青年与成人感染CT，我国近年来病例数也不断增加。CT感染与年龄关系密切，年轻人感染率较高。性伙伴越多，感染的机会也越多。CT感染若不及时治疗也可引起多种疾病，且伴有严重的并发症和后遗症。在男性可引起阴道炎、附睾炎。对于女性患者，症状较轻或不典型而未医治的，40%的可引起盆腔炎；至于有明显感染症状的，患盆腔炎的几率更大。在这些盆腔炎患者中，20%的会引起不育症，18%的会转化成慢性盆腔炎，9%的可能会导致有生命危险的输卵管受孕。CT感染可通过母婴传播引起新生儿肺炎及眼结膜炎，还可引起胎膜早破、早产、新生儿死亡等。感染衣原体的孕妇，产下的婴儿有50%~70%将成为带菌者。目前，NG和CT感染在我国的发病率呈不断上升的趋势，15～24岁的青年人是NG和CT发病率最高的人群，且感染女性生殖道的机会远远高于感染男性生殖道。由于这类疾病的感染常常无症状或症状很轻，患者得了性病却不自知，绝大多数患者不会主动就医，从而延误病情，对患者的身心健康造成很大的危害，还导致疾病的更广泛的传播。因此，针对CT和NG感染开展广泛的筛查工作对于此类疾病的早期诊断和治疗具有非常重要的作用。在美国，已经发起了针对PDF文件使用"pdfFactoryPro"试用版本创建www.fineprint.com.cnCT、NG的大规模的筛查工作。在国内，这方面的工作还亟待开展。主要的检测技术目前，针对NG和CT主要的实验室检测方法主要有分离培养法、涂片镜检法、酶免测定法、常规PCR法、实时PCR技术等。其中，实时PCR技术具有简便、快捷、特异性高、定量准确等优点，适用于检测高、低发病率人群，可望在性病感染的早期筛查、早期诊断和早期治疗中常规使用。一、胞生物学检测方法1.分离培养法此法是将分泌物、血液、尿液、大便、痰液及体液等标本在限菌条件下于特定培养基上进行分离培养，依次而判断病原微生物的种类，用于定性诊断。该方法应用比较早，培养成本比较低，操作简单，特异性较高，可在各级医院广泛开张。但是培养耗时比较长，同时敏感性较低，可能因病原微生物的量过少，或接种后病原微生物不成活而延误病情。此方法是淋病筛选和发现病例的主要方法，其检出率与培养基质量关系比较密切，但其不足之处是等待报告的时间较长。对于沙眼衣原体，一般培养法不能使其生长，多采用细胞培养法。细胞培养法几乎没有假阳性，被认为是诊断CT感染的"金标准"，并可作为治疗效果的判断标准及作为评价其它非培养法的标准。早期曾试图用尿标本做培养，但阳性率甚低，只能采用尿道或宫颈拭子。细胞培养法缺点是费用高、操作繁琐、培养周期长，且实验室技术要求高。由于细胞培养特异性是100%，因此，国外该方法在某些法律纠纷上仍具有重要意义，如寻找性虐待的证据等。细胞培养的敏感性为70%～96%，它受到标本采集、转运、保存以及实验室条件和技术的影响，因而难以成为临床常规检测手段，多用于科研和...