MTT检测细胞活性的操作方法VIP免费

1/3检测细胞活性的操作方法一、是什么是一种粉末状化学试剂，全称为()()，汉语化学名为(，二甲基噻唑)，二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝。是一种黄颜色的染料。二、法用来做什么简单地说：是一种检测细胞存活和生长的方法。主要有两个用途．药物（也包括其他处理方式如放射线照射）对体外培养的细胞毒性的测定；．细胞增殖及细胞活性测定。三、为何可以用来做上述工作检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（）能溶解细胞中的甲瓒，用酶标仪在波长处测定其光吸收值，在一定细胞数范围内，结晶形成的量与细胞数成正比。根据测得的吸光度值（值），来判断活细胞数量，值越大，细胞活性越强（如果是测药物毒性，则表示药物毒性越小）。四、实验所需材料．溶液的配制通常配成的终浓度为,须用或生理盐水做溶剂。市面上一般的包装为或对于这样的小包装，厂家都是将放入小管中的，个人建议不要再用天平称量分装，而应该一次性将其全配制成溶液，如用来溶解。具体做法：预先在离心管（没有的话，可用培养瓶替代）加入，从中先吸取装入含的小管中，吹打若干次后将其移入离心管，然后再混匀。可以重复几次，以使小管中的不残留于管内。将完全混匀后，用μ滤膜过滤以除去溶液里的细菌，分装避光(避光袋或是黑纸、锡箔纸包住)可长期保存于度。按细胞培养板每孔需加计算，一般每孔板约需，所以分装时可考虑每管分装。对于大包装，可按上述方法称取一部分溶解，也有人将粉剂分装在管里，用的时候现配，直接往培养板中加。注意事项：.在配制和保存的过程中，容器最好用铝箔纸包住。配成的需要无菌，对菌很敏感一般最好现用现配，过滤后度避光保存两周内（个人曾做过度避光保存周的溶液，效果仍然不错）有效，或配制成保存在度长期保存，避免反复冻融，最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。当变为灰绿色时就绝对不能再用。有致癌性，用的时候小心,有条件最好带那种透明的簿膜手套.．甲瓒溶解液二甲基亚砜，可以直接溶解，无需配制，使用方便，溶解速度快，但对人体毒性较大，且需去除原培养液，在去除培养液的过程中，可能会把结晶去掉，导致结果不稳定。三联溶解液：，异丁醇，用双蒸水溶解配成溶液，该溶解液不需去除原培养基，但溶解较慢。该溶解液因含有，在低温保存的时候易产生结晶，因此在用之前必须提前几小时拿至室温，将结晶全部溶解后再使用。2/3五、法实验步骤.胰酶消化对数期细胞，终止后离心收集，制成细胞悬液，细胞计数调整其浓度至×。对于初学者而言，要使细胞达到×往往不知从何处着手，我在这里向大家提供一个简单的方法以初步确定细胞数量。以一般细胞培养常用的为例，)细胞密度在长到约（下图所示为密度时细胞的大致状态），消化离心收集后，将上清去掉，加入培养基使其混匀。)另取一支新的无菌离心管（为下一步接种孔板用），装入约培养基.)从第一步准备的细胞悬液中取,加入上管，混匀后细胞计数，此时一般为或小于×，该浓度相当于细胞计数板个大格内每大格平均个细胞（见下图）；如果不够该浓度，再根据计数的结果滴加细胞悬液，每滴按计算。)细胞数量因实验目的不同应做相应调整，如一般细胞增殖实验每孔个就可以（相当于细胞悬液密度为×），细胞毒性实验每孔—个（相当于细胞悬液密度为×）。此外，还应根据细胞本身特性，如生长快慢，来决定细胞数量。比如：生长较快的细胞密度可略小。．将细胞悬液制备好后，轻轻混匀，每孔加入,这样待测细胞的密度为—孔（边缘孔用无菌填充）。注意：因细胞在混匀后仍要继续沉降，因此接种的过程中要反复多次混匀，如每加个孔就混匀一次，以确保接种的细胞密度在各孔之间完全相同，这对于的结果至关重要。.将接种好的细胞培养板放入培养箱中培养，至细胞单层铺满孔底（孔平底板）,加入浓度梯度的药物,原则上，细胞贴壁后即可加药，或两小时，或半天时间，但我们常在前一天下午铺板，次日上午加药.一般个梯度,每孔,设个复孔.建议设个，否则难以反应真实情况。下图可做为孔板的的参考步局。对于加药，有人直接...